Эффективность диагностических тестов в выявлении вируса лейкоза крупного рогатого скота в оздоравливаемых от лейкоза стадах

• Автор: Петропавловский, Максим Валерьевич
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Екатеринбург
• Количество страниц: 143 с. : ил.

Содержание
Введение
1. Обзор литературы
1.1 Эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в субъектах Российской Федерации и зарубежом
1.2 Современные диагностические тесты
1.2.1 Реакция иммунной диффузии (РИД)
1.2.2 Иммуноферментный анализ (ИФА)
1.2.3 Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
1.3 Генотипическое разнообразие В Л КРС
2. Собственные исследования
2.1 Материалы и методы исследований
2.2 Результаты исследований
2.2.1 Распространение лейкоза крупного рогатого скота в Уральском регионе
2.2.1.1 Характеристика эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в Челябинской области
2.2.1.2 Характеристика эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в Тюменской области
2.2.1.3 Характеристика эпизоотической'ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в Курганской области
2.2.1.4 Характеристика эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в Свердловской области
2.2.2 Сравнительная оценка тестов РИД, ИФА, ПЦР при диагностике лейкоза крупного рогатого скота
2.2.3 Результаты определения чувствительности комплекса диагностических тестов (РИД, ИФА, ПЦР) в.оздоровленных от лейкоза фермах
2.2.4 Определение чувствительности и специфичности комплекса диагностических тестов (РИД, ИФА, ПЦР) у коров оздоравливаемой фермы
2.2.5 Чувствительность и специфичность диагностических тестов (РИД,
ИФА, ПЦР)-в выявлении носителей ВЛ КРС среди молодняка крупного рогатого скота
2.2.6 Характеристика молекулярно - генетической структуры вируса лейкоза, циркулирующего в популяции крупного рогатого скота разных регионов

3. Обсуждение результатов исследований
4. Выводы
5. Практические предложения
6. Список литературы

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. Одним из самых распространенных хронических инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных, наносящих значительный экономический ущерб животноводству, является лейкоз крупного рогатого скота (BJI КРС). Проблема лейкоза имеет общебиологическое и медицинское значение ввиду близкого морфологического и эволюционного родства вируса лейкоза крупного рогатого скота с вирусами Т-клеточного лейкоза человека и до настоящего времени не потеряла своей актуальности. Наоборот, лейкоз вышел на первое место в ряду хронических инфекций крупного рогатого скота. Болезнь поражает в первую очередь высокопродуктивных коров* что, в свою очередь, является угрозой национальному генофонду крупного рогатого скота страны (II.И. Петров, 2001; H.A.. Мальцева; с соавт., 2003; I .A. Симонян, 2005; П.Н. Смирнов с соавт., 2007; М.И. Гулюкин, 2008; 2009; И.М. Донник с. соавт., 2000,-2008* 2010; Л.К. Эрнст, H.A. Зиновьева, 2008).
Заболевание наносит экономический ущерб, который; слагается из недополученного* молока, приплода*, ограничений в реализации молока и племенного молодняка, преждевременной; выбраковки коров и быков — производителей, утилизации туш, расходов на проведение оздоровительных мероприятий. Кроме того, установлено; достоверное снижение питательной ценности молока инфицированных ВЛ’ КРС коров из-за* уменьшения содержания в нем общего белка и большинства, аминокислот, в том числе пяти незаменимых (ГІ.II. Смирнов; 2007; М;И: Гулюкин, А.Ф: Валихов, В.М. Нахмансон, Л’.А. Иванова, К.П. Грек, С.В. Лопунов; 2008; Т.А. Гаврилова, 2009).
Уже многие годы, проводимый; в хозяйствах Российской. Федерации, контроль над эпизоотическим процессом лейкоза* КРС, не эффективен. Громаднейший расход сил и средств на борьбу с этой факторной инфекционной болезнью приводит к тому, что уже десятилетия во многих субъектах Российской Федерации эпизоотическая ситуация не только не

улучшается, но ухудшается, даже на фоне снижения численности КРС (С.И. Джупина, 2008).
Масштабность распространения эпизоотии лейкоза свидетельствует о том, что традиционная система оздоровительных мероприятий не позволяет в должной мере контролировать и управлять эпизоотическим процессом. В неблагополучных по лейкозу стадах есть все основания считать, что практически все животные в той или иной степени инфицированы BJ1 КРС (А.Ф. Лебедев, 2009).
На сегодняшний день, единственными наиболее эффективными методами борьбы с лейкозом крупного рогатого скота, являются его ранняя диагностика, изоляция и методичная выбраковка больных животных с последующим формированием свободного от вируса лейкоза стада. Поэтому, совершенствование методов его ранней диагностики является актуальной задачей. Одними из основных требований, предъявляемым к диагностическим тестам, являются чувствительность и специфичность (В.П. Федотов, О.В. Иванов, О.Ю. Иванова, 2006; М.И. Гулюкин 2007; И.М. Донник, А.Т. Татарчук, 2008, 2009; А.М. Смирнов 2008;
В.В. Субботин, Д.В. Колбасов, 2008).
В существующих правилах и. методических указаниях по лейкозу наряду с РИД, упоминаются такие диагностические методы, как иммуноферментный анализ (ИФА) и полимеразная цепная реакция (ПЦР). Однако, в отличие от реакции иммунодиффузии. (РИД), которая получила широкое распространение при диагностике инфекции вируса лейкоза, региональный регламент их применения для оздоровления хозяйств не разработан. В этой связи разработка экономически рационального регламента диагностики инфекции ВЛ КРС является актуальной проблемой, требующей решения (В.В. Храмцов, Н.Г. Двоеглазов, Т.А. Агаркова,
H.A. Осипова, 2010).
Проведение мероприятий по ликвидации лейкоза должно опираться на исследование методом РИД, но и необходимо осуществление

реальный инфекционный процесс достигает максимальной эффективности, результирующейся в интенсивном иммунном ответе и накоплении значительного количества антител, достаточных для выявления в условиях радиальной иммунодиффузии. РИД по своей сущности — лишь качественная серологическая реакция, позволяющая осуществлять ретроспективную диагностику per se (В.В. Макаров, 2005). Кроме того, с помощью системы на основе РИД исходно не возможны какие - либо выводы относительно трансмиссии и распространения вируса лейкоза в категории животных самого высокого риска (ранее 6 — месячного возраста). В то же время ПЦР, как высокоразрешающий вариант прямой микробиологической диагностики, весьма перспективна для таких целей. Таким образом, потенциальная возможность управления эпизоотическим процессом при лейкозе крупного рогатого скота, заключающаяся- в своевременном выявлении источника инфекции, возрастает в три раза (И.С. Пономарева, 2009).
Появление в оздоровленных хозяйствах серопозитивных животных, по мнению авторов, связано не только с низкой чувствительностью РИД, но и с разнообразием генотипов вируса лейкоза и высокой вариабельностью его генома. Требует дальнейшего изучения природа возбудителя. Молекулярно -генетические исследования последних лет показали, что ВЛ КРС подвергается мутациям и в настоящее время определено 6 генотипов этого вируса. Знание особенностей этих подтипов позволяет организовать более эффективные меры борьбы с лейкозом крупного рогатого скота (D. Beier, Р. Blankenstein, О. Marquardt, J. Kuzmak, 2001; C.B. Чичинина, 2005; Е.В. Дробот, 2007; Ф.Ф Зинатов, 2008; И.М. Гулюкин, А.И. Клименко,
Н.Ф. Ломакина и др., 2009, 2010; И.М. Донник и др., 2010, П.Н. Смирнов,
Н.В. Грачева, 2009, 2010).