Продуценты цитринина и охратоксина А в составе микобиоты кормов

• Автор: Васильев, Дмитрий Александрович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 116 с. : ил.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ,
ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ
АГ - антиген АТ - антитела
БВМД - белково-витамино-минеральная добавка
БСА - бычий сывороточный альбумин
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ИФА - иммуноферментный анализ
ОА - охратоксин А
ОП - оптическая плотность
ПАТ - патулин
ПФ - подвижная фаза
ТСХ - тонкослойная хроматография
УФ - ультрафиолетовый
ФДА - о-фенилендиамин
ФСБ-т - фосфатно-солевой буферный раствор с твином
ЦИТ - цитринин
ЦПК - циклопиазоновая кислота

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1 Нефротоксины - цитринин и охратоксин А
1.1 Токсикологические свойства, встречаемость в кормах
1.2 Продуцирующие микромицеты
1.3 Методология поиска токсигенных культур
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2 Объекты и методы исследований
3 Микробиометод для оценки токсинообразования грибов
3.1 Оптимизация условий пробоподготовки и анализа
3.2 Метрологические характеристики
4 Токсигенный потенциал у представителей микобиоты кормов
4.1 Грибы рода Penicillium
4.1.1 Доминирующие виды
4.1.2 Сопутствующие виды
4.1.3 Редко встречающиеся виды
4.2 Грибы рода Aspergillus
4.2.1 Распространенные виды
4.2.2 Сопутствующие виды

5 Продуценты нефротоксинов в контаминированных кормах
5.1 Активные штаммы Pénicillium granulatum
5.2 Характеристика моноконидиальных культур
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ 1 Методические рекомендации по определению цитринина и охратоксина А в культурах санитарно-показательных
микромицетов
ПРИЛОЖЕНИЕ 2 Справки о депонировании штаммов
микроорганизмов

Количественный анализ ПАТ в экстрактах культур выполняли методом ТСХ на пластинках силуфол UV-254 в подвижной фазе (ПФ) толуол-этилацетат-муравьиная кислота (5:4:1) Rf 0,3 Camag TLC Scanner II, Швейцария нижний порог измерения 0,15 мкг в пятне, чувствительность, 20 ООО нг/мл среды. Стандартный раствор ПАТ готовили в смеси бензола и ацетонитрила в объемном соотношении 9:1, и концентрацию 100 мкг/мл подтверждали спектрофотометрическим методом (А. = 275 нм, е = 16800).
Результаты количественного анализа микотоксинов представляли в виде средних значений по 2 повторностям. Для статистической обработки результатов использовали пособие (5).
3 Микробиометод для оценки токсинообразования грибов
3.1 Оптимизация условий пробоподготовки и анализа
В ходе разработки метода для сравнительной оценки токсинообразования грибов было необходимо определить целесообразные способы выращивания культур и извлечения токсинов, дать обоснование приемам подготовки эталонных растворов токсинов и выбрать условия выполнения собственно аналитической стадии.
У всех культур при выращивании в чашках Петри на сусловом агаре при 21-23°С за 7 суток происходило формирование зрелых колоний. Задача получения фрагментов мицелиально-споровой биомассы с одинаковой и малой площадью была решена выращиванием грибов в стеклянных флаконах, имеющих внутренний диаметр дна около 16 мм. Минимальный объем питательной среды, достаточный для 7-суточного развития грибов, составил 1 см3. Редкие случаи растрескивания агарового слоя, которые отмечались на 5-е сутки, были связаны только с недостаточной герметизацией флаконов.
Выбор в качестве экстрагента смеси ацетонитрила и воды в объемном соотношении 84:16 вполне удовлетворял планам использования в анализе