Биологические свойства вируса гриппа птиц подтипа H5, выделенного на территории Российской Федерации

• Автор: Казарян, Аркадий Сасунович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 116 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений

1. Введение

1.1. Актуальность темы

1.2. Степень разработанности проблемы

1.3. Цель и задачи исследований

1.4. Научная новизна

1.5. Практическая значимость

1.6. Апробация и публикации результатов исследований

1.7. Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1.8. Личный вклад автора в выполнение работы
2. Обзор литературы
2.1. Грипп птиц
2.1.1. Общая характеристика болезни
2.1.2. Эпизоотическая ситуация по гриппу птиц в Российской
Федерации и в мире
2.1.3. Характеристика возбудителя
2.1.4. Диагностика заболевания
2.1.5. Меры профилактики и борьбы
2.1.6. Заключение по обзору литературы
3. Собственные исследования
3.1. Материалы
3.1.1. Вирусы
3.1.2. Сыворотки
3.1.3. Питательные среды и растворы
3.1.4. Культуры клеток
3.1.5. Набор для диагностики гриппа и Ньюкаслской болезни
3.1.6. Оборудование
3.2. Животные
3.3. Методы исследования

3.3.1. Анализ первичных паспортных характеристик полученных
штаммов вируса гриппа А птиц
3.3.2. Отбор и подготовка проб к анализу
3.3.3. Выделение вируса гриппа А птиц и его идентификация
3.3.4. Культивирование вируса гриппа А птиц на куриных и утиных
эмбрионах
3.3.5. Культивирование вируса гриппа А птиц в первичных и
перевиваемых культурах клеток
3.3.6. Культивирование вируса гриппа А в перевиваемых культурах
клеток в присутствии трипсина
3.3.7. Постановка реакции агглютинации эритроцитов
3.3.8. Постановка реакции задержки гемагглютинации эритроцитов.
3.3.9. Оценка патогенности вируса гриппа А птиц для кур, голубей
и диких утят
3.3.10. Определение интравенозного индекса патогенности
3.3.11. Получение специфической сыворотки к вирусу гриппа А
3.3.11.1. Получение специфической сыворотки к вирусу гриппа А
птиц подтипа Н5 на курах
3.3.11.2. Получение специфической сыворотки к вирусу гриппа А птиц
подтипу Н5 на козах
3.3.12. Электронная микроскопия
3.3.13. Иммунная электронная микроскопия
3.3.14. Полимеразная цепная реакция с этапом обратной
транскрипции (ОТ-ПЦР)
3.3.15. Изучение устойчивости вируса гриппа А птиц к воздействию
различных температур
3.3.16. Лиофилизация
3.3.17. Статистическая обработка результатов исследований
3.4. Результаты собственных исследований

Определение типовой принадлежности и
гемагглютинирующей активности вируса гриппа А птиц
Оценка гемагглютинирующей активности
Инфекционная активность и вирулентность вируса гриппа А
птиц для куриных и утиных эмбрионов
Динамика гибели КЭ после заражения штаммами вируса
гриппа А птиц
Инфекционная активность и вирулентность вируса гриппа А
птиц для кур
Интравенозный индекс патогенности
Инфекционность штаммов вируса гриппа птиц для голубей и
диких утят
Определение восприимчивости голубей к вирусу гриппа А птиц при контактном содержании с инфицированной птицей. Определение инфекционности вируса гриппа А птиц для
голубей при интраназальном заражении
Определение чувствительности диких утят к вирусу гриппа А

Культуральные свойства изучаемых штаммов вируса гриппа
А птиц
Изучение устойчивости вируса гриппа А птиц к воздействию
различных температур
Получение специфической сыворотки к вирусу гриппа А

Электронная микроскопия
Иммунная электронная микроскопия
Молекулярно-генетические исследования
Обсуждение результатов
Выводы
Контроль над гриппом должен строиться на методах раннего обнаружения и идентификации, оценке биологических характеристик выделяемых штаммов, изготовлении новых вакцин и диагностикумов, на сочетании карантинных мер, выборочных уничтожениях инфицированных популяций птиц и вакцинации производственных стад и поголовья частного сектора. Применение разнообразных средств и методов неспецифической и специфической профилактики и борьбы с инфекцией обусловлено многообразием форм течения болезни, генетической, лабильностью возбудителя, которая обусловливает возникновение новых высоко патогенных штаммов. Главным инструментом современной профилактики является мониторинг и контроль за резервуаром гриппа, которым является мигрирующая птица, включая популяции птиц прибрежных акваторий.
В связи с изложенным изучение биологических свойств выделяемых вирусов гриппа в период эпизоотий и в межэпизоотический период является весьма актуальной задачей. Решение этой задачи позволит поддерживать готовность к проведению противоэпизоотических мероприятий против новых высокопатогенных вариантов вируса гриппа А птиц включая экспресс изготовление вакцинных препаратов и диагностических средств.
3. Собственные исследования
3.1. Материалы
3.1.1. Вирусы
3.1.1.1. В работе использовали частично охарактеризованные по принадлежности к подтипу Н5№ штаммы вируса гриппа А птиц, полученные из ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, г. Москва:
Штамм H5N1 А^иск/Иоуо^1Ыгхк/5б/05 - изолирован из клоакальных, трахеанальных смывов и внутренних органов домашней утки (28.07.2005) в