Морфофункциональная характеристика эндотелиальных прогениторных клеток при хронической сердечной недостаточности

• Автор: Бондаренко, Наталья Анатольевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 113 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава I. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ ОБ
ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ ПРОГЕНИТОРНЫХ КЛЕТКАХ
1.1. Васкулогенез и ангиогенез, как механизмы образования
новой сосудистой сети
1.2. Фенотипическая характеристика популяций циркулирующих эндотелиальных прогениторных клеток
1.3. Источники эндотелиальных прогениторных клеток
1.4. Участие эндотелиальных прогениторных клеток в процессах неоваскуляризации
1.5. Функциональные свойства эндотелиальных прогениторных клеток
1.5.1. Мобилизация эндотелиальных прогениторных клеток в периферическую кровь
1.5.2. Миграция и хоуминг эндотелиальных прогениторных
клеток из периферической крови в ткани
1.5.3. Цитокинпродуцирующая активность эндотелиальных прогениторных клеток
1.6. Морфологическая характеристика «ранних» и «поздних» эндотелиальных прогениторных клеток in vitro
1.7. Изучение функциональных свойств эндотелиальных прогениторных клеток и эндотелиальных клеток in vitro
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика пациентов
2.2. Мобилизация МНК периферической крови
2.3. Фенотип мобилизованных МНК, обогащенных ЭПК
2.4. Иммунноцитохимическое исследование МНК, обогащенных ЭПК, мобилизованных введением G-CSF из костного мозга
2.5. Оценка пролиферативной активности МНК МТТ-тестом
2.6. Исследование уровней цитокинов в кондиционных средах от МНК, обогащенных ЭПК, и культур ЭПК после мобилизации

2.7. Получение культуры ЭПК из МНК после мобилизации G-CSF
от пациентов с ХСН
2.8. Культура клеток эндотелиальной линии ЕА.Ну926 человека
2.9. Оценка пролиферативной активности культуры
ЭПК, мобилизованной G-CSF, и клеток эндотелиальной линии ЕА.Ну926 на аппарате xCELLigence System
2.10. Оценка миграционной способности культуры ЭПК, мобилизованной G-CSF, и клеток эндотелиальной линии ЕА.Ну926 на аппарате xCELLigence System
2.11. Оценка миграционной способности клеток эндотелиальной линии ЕА.Ну926 на аппарате Cell-IQ
2.12. Исследование продукции стойких метаболитов оксида азота
в кондиционной среде от культуры ЭПК
2.13. Статистическая обработка полученных результатов
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Фенотипическая характеристика циркулирующих ЭПК, мобилизованных G-CSF, от пациентов с ХСН
3.2. Исследование функциональной активности МНК, обогащенных ЭПК, полученных в ходе процедуры мобилизации G-CSF от пациентов с ХСН
3.2.1. Изучение пролиферативной активности МНК, обогащенных ЭПК, в ходе мобилизации G-CSF от пациентов с ХСН
3.2.2. Изучение экспрессии рецептора хоуминга CXCR4 на ЭПК
в ходе мобилизации G-CSF от пациентов с ХСН
3.2.3. Цитокиновый профиль МНК, обогащенных ЭПК, в ходе мобилизации G-CSF от пациентов с ХСН
3.3. Изучение взаимосвязей количества циркулирующих ЭПК, мобилизованных G-CSF, с продукцией цитокинов и ростовых факторов
3.4. Оценка способности МНК, мобилизованных G-CSF,
от пациентов с ХСН дифференцироваться в ЭПК in vitro
3.5. Исследование функциональной активности культуры ЭПК периферической крови после курса мобилизации G-CSF от пациентов с ХСН
3.6. Исследование цитокинового профиля культур «ранних» и «поздних» ЭПК периферической крови после курса мобилизации G-CSF от пациентов с ХСН

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

содержащей факторы роста и эмбриональную телячью сыворотку. Через 4-5 суток адгезирующие клетки представляют собой ЭГЖ по морфологической характеристике, экспрессии поверхностных маркеров CD31, CD 144, VEGFR2, фактора фон-Виллибранда и по возможности связывать липопротеиды низкой плотности (LDL) (Schmeisser, 2003).
Значительные изменения в протокол были внесены Ito Н. (1999) и НШ }. (2003). Ito Н. (1999) использовал МНК периферической крови, которые культивировал во флаконах, предварительно обработанных фибронектином, в эндотелиальной среде, но через 24 часа неприлипшие клетки заново пересевали во флаконы с фибронектином. Данный протокол минимизировал попадание в культуру ЭПК клеток моноцитарного происхождения и зрелых эндотелиальных клеток. В дальнейшем Hill J. с коллегами усовершенствовал методику, МНК культивировали во флаконах, предварительно обработанных фибронектином в течение 48 часов, затем неприлипшие клетки удалялись, а образовавшиеся колонии клеток были представлены ЭПК. Появляющиеся кластеры клеток были названы «колонии ЭПК», «колониеобразующие единицы (КОЕ) эндотелиальных клеток» и, наконец, «КОЕ-Хилла». Таким образом, способность клеток образовывать КОЕ-Хилла является особенностью и морфологическим маркером ЭПК.
Как известно «ранние» и «поздние» ЭПК, полученные in vitro, вносят различный вклад в развитие сосудистой сети.
Так, косвенное участие «ранних» ЭПК в регенерации эндотелия сосудов подтвердили доклинические исследования, которые продемонстрировали влияние «ранних» ЭПК на процессы сосудообразования путем продукции цитокинов и ростовых факторов. «Ранние» ЭПК продуцируют различные цитокины: SDF-1, VEGF, инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1), HGF, IL-8, которые увеличивают пролиферацию, миграционную активность «зрелых» эндотелиальных клеток (Urbich С., 2005). Важно отметить, что спектр продукции цитокинов и ростовых