Роль Translocator protein (TSPO) в регуляции пролиферации и апоптоза опухолевых клеток при BRAF-положительной меланоме кожи

• Автор: Гырылова, Светлана Николаевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 96 с. : 10 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Современные представления о молекулярных механизмах развития меланомы кожи. Нарушения клеточной пролиферации

1.2. Нарушение регуляции апоптотической гибели клеток при меланоме кожи

1.3. Апоптоз-ассоциированный белок TSPO и применение его лигандов в экспериментальной терапии злокачественных новообразований

Глава 2. Материал и методы исследования

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Модуляция уровня TSPO в клетках меланомы лигандом TSPO

PKI 1195 и ингибитором МАРК U0

3.2. Оценка интенсивности клеточной пролиферации и апоптоза после инкубации клеток меланомы с лигандом TSPO РКП 195, ингибитором МАРК U0
3.3. Молекулярно-генетический анализ биоптатов кожи . больных
первичной меланомой для верификации мутации гена BRAF V600E
Глава 4. Обсуждение полученных результатов
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
PCNA (proliferating cell nuclear ап^еп)-ядерный антиген пролиферирующих клеток
TSPO - Translocator protein
МАРК (Mitogen activating protein kinase signaling pathway) - сигнальный каскад митоген-активированных протеинкиназ
МЕК (MAP kinase kinase) - МАРК-сигналрегулирующая киназа мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота
РК11195 -1-(2-хлорофенил)-1Т-метил-Ы-(1-метил-пропил)-
изохинолинкарбоксамид
ПДРФ анализ - анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов ПЦР - полимеразная цепная реакция УФО - ультрафиолетовое облучение

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Злокачественные новообразования кожи, включая меланому кожи, в структуре всех злокачественных опухолей человека составляют более чем одну третью часть, что делает их одними из наиболее часто встречающихся типов злокачественных новообразований [Pollock P.M. et al., 2003]. Злокачественная меланома кожи, являющаяся одной из наиболее агрессивных опухолей, в Российской Федерации относится к редким видам злокачественных новообразований [Кубанова A.A. и др., 2007]. Несмотря на это, в Красноярском крае заболеваемость меланомой увеличивается, параллельно идет также увеличение показателей смертности [Гырылова С.Н., 2009]. При этом прирост данных показателей происходит интенсивно, уровень смертности в Красноярском крае приближается к соответствующим показателям стран с наиболее высокими показателями заболеваемости. Все это позволяет расценивать меланому кожи как важную медико-социальную проблему, которая наносит невосполнимый экономический ущерб обществу.
Меланома кожи является не только клинически разнородной опухолью, классифицирующейся на различные клинические и гистологические варианты. По современным данным меланома характеризуется изначально молекулярным и генетическим разнообразием, определяющим клинический полиморфизм, а также особенности течения заболевания.
Пролиферация меланоцитов, выживание, дифференцировка и миграция являются важнейшими элементами нормальной физиологии кожи. Как показывают последние исследования, одним из ключевых изменений, происходящих при развитии меланомы кожи, является мутагенная активация сигнального каскада митоген-активированных протеинкиназ (МАРК).

United Kingdom) с диаминобензидином в качестве хромогена. В дальнейшем образцы докрашивали гематоксилином. Подсчёт результатов
иммуноцитохимического анализа проводили путем подсчета положительно окрашенных клеток при увеличении х400 с помощью микроскопа Olympus ВХ-41. Определялся процент положительно окрашенных клеток на 100 клеток.
Оценка уровня апоптоза
Выраженность апоптоза оценивалась с помощью окраски акридиновым оранжевым/бромистым этидием (АО/ЕВ) (Gerbu Biothechnick GmbH, MP Biomedicals Inc.) согласно Ribble D., 2005 [Ribble D. et al., 2005]. Определялся процент апоптотических клеток с ядром, окрашенным (полностью или фрагментарно) в оранжевый цвет. Ядра живых клеток окрашивались в зеленый цвет. Визуализация проводилась с помощью флюоресцентного микроскопа Primo Star (Carl Zeiss Microimaging GmbH), подсчитывалось число
апоптотических клеток на 100 визуализируемых клеток.
2.4. Молекулярно-генетические методы исследования
Выделение ДНК
Для определения полиморфизма гена BRAF V600E в качестве материала использовались гистологические срезы меланомы кожи, которые были получены от 47 пациентов, находящихся на стационарном лечении после хирургического иссечения опухоли в КГУЗ «Красноярский краевой
онкологический диспансер им. А.И. Крыжановского» с диагнозом
злокачественная меланома кожи (рубрика С43) в соответствии с МКБ-10. Из 47 пациентов 29 было женского, 18 мужского пола. Средний возраст женщин составил 53 [ДИ 95%, 47,75-59,25] года, мужчин 55 [ДИ 95%, 48-62,5] лет.