Дифференцировка и регенерация скелетных мышц мышей mdx после клеточной терапии стволовыми клетками костного мозга

• Автор: Соколова, Анастасия Владимировна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 139 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение

I. Обзор литературы

1. Дифференцировка и регенерация поперечнополосатых скелетных мышц

1.1. Развитие скелетных мышц в эмбриогенезе

1.2. Формирование нейромышечных соединений

1.3. Регенерация скелетных мышц

1.4. Миогенные клетки в регенерации скелетных мышц

2. Мышечная дистрофия Дюшенна

2.1. Дистрофии и дистрофин-ассоциированный гликопротеиновый комплекс
2.2. Мыши тс1х как животная модель мышечной дистрофии Дюшенна
2.3. Лечение мышечной дистрофии Дюшенна
2.3.1. Генная терапия мышечной дистрофии Дюшенна
2.3.2. Клеточная терапия мышечной дистрофии Дюшенна
3. Воздействие слабых комбинированных полей на биологические объекты
3.1. Ионный циклотронный резонанс (модель А.Р. Либова)
3.2. Теория магнитного параметрического резонанса (в биосистемах) (Теория В.В. Леднева)
II. Материалы и методы
1. Животные
2. Внутримышечная трансплантация 1лп(-)-СККМ мышей С57ВЬ/6 и С57ВЬ/6, экспрессирующих йРР, мышам тбх
2.1. Выделение Ып(-)-СККМ
2.2. Цитофлуориметрический анализ Ып(—)-СККМ

2.3. Внутримышечная трансплантация Ып(-)-СККМмышам тсЬс
3. Создание радиационных химер
4. Облучение радиационных химер тс1х слабым комбинированным магнитным полем
5. Гистологические и иммуногистохимические методы
5.1. Получение срезов мышц
5.2. Оценка экспрессии СИР после трансплантации СККМ (7НР (+) доноров
5.3. Иммуногистохимия
5.4. Окраска гематоксилином-эозином
5.5. Определение площади ППМВ
6. Исследование НМС
III. Результаты
1. Влияние внутримышечной трансплантации 1лп(-)-СККМ на регенерацию и дифференцировку ППМВ мышей тбх
1.1. Участие ОРР (+) Ьт(-)-СККМ в регенерации ППМВ мышей тсЬс после внутримышечной трансплантации
1.2. Внутримышечное введение Ып(~)-СККМ вызывает усиление дифференцировки ППМВ мышей тсЬс
1.3. Изменение структуры НМС мышей тсЬс после внутримышечного введения Ып(—)-СККМ
2. Участие СККМ в регенерации и дифференцировке ППМВ мышей тбх у радиационных химер
2.1. Трансплантация СККМ облученным в дозе 5 Гр мышам тс!х не вызывает усиления дифференцировки ППМВ
2.2. Влияние Са2 -КМП на участие СККМ в дифференцировке ППМВ химерных мышей тдх
2.3. Влияние замены костного мозга на фоне рентгеновского облучения в дозе 3 Гр на дифференцировку ППМВ мышей тсЬс

IV. Обсуждения
1. 1лп(-)-СККМ после внутримышечного введения участвуют в
. регенерации ППМВ мышей тёх и усиливают их дифференцировку
2. ККМ участвуют в регенерации и дифференцировке 1111МВ мышей тёх после внутривенного введения облученным мышам тёх
2.1. Воздействие Са2+-КМП увеличивает эффективность участия
СККМ в дифференцировке ППМВ мышей тсЬс
2.3. Внутривенное введение ККМ мышам тс!х, обученным в дозе 3 Гр усиливает экспрессию . дистрофина и дифференцировку ППМВ
мышей тсЬс
Выводы
Список литературы

в формировании синапсов и в организации утрофина, АХРов и ацетилхолинэстеразы в НМС (Adams et al., 2000).
а-дистробревин имеет три изоформы, возникающие в результате альтернативного сплайсинга. а-дистробревин взаимодействует с дистрофином и с синтрофинами. У а-дистробревин-отрицательных мышей наблюдается полное отсутствие nNOS на сарколемме, несмотря на присутствие других компонентов DAPC, таких как p-дистрогликан, а- и р-сиркогликаны, дистрофии и синтрофин (Lapidos et al., 2004b). Так же а-дистробревин требуется для сохранения кластеров АХРов в составе НМС (Banks et al., 2003).
Саркоспан — гидрофобный белок, амино и карбоксильный конец которого обращены к цитоплазме (Lapidos et al., 2004b).
Кавеолин-3 экспрессируется только в поперечнополосатых мышцах. Как и другие формы кавеолина, кавеолин-3 может олигомеризоваться с формированием кавеол, небольших инвагинаций мембраны, которые участвуют в организации мембраны и поглощении небольших объемов растворов. Отсутствие кавеолина-3 усиливает апопотоз мышечных волокон. Кавеолин непосредственно связан с nNOS (Lapidos et al., 2004b).
Утрофин - аутосомальный гомолог дистрофина с молекулярной массой 400 кДа, локализованный в НМС и в мышечно-сухожильных соединениях. Кроме полноразмерного, выявлены несколько предполагаемых коротких изоформ утрофина, которые могут быть гомологичны изоформам дистрофина Dp 140, Dp 116, Dp 71 (Lumeng et al., 1999). Утрофин, по-видимому, важен для формирования третичной структуры постсинаптического аппарата НМС. Предполагают, что утрофин и дистрофии играют важную роль в кластеризовании АХРов и могут участвовать в созревании постсинаптического аппарата (Banks et al., 2003).