Гисто- и цитогенез печени человека и крысы в ходе пренатального развития и репаративной регенерации

• Автор: Гумерова, Аниса Азатовна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 230 с. : 134 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1 ВВЕДЕНИЕ

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Развитие печени

2.1.1 Основные события в развитии печени

2.1.2 Развитие сосудов печени

2.1.3 Гемопоэз в печени

2.1.4 Развитие клеток печени

2.1.4.1 Развитие гепатоцитов

2.1.4.2 Развитие холангиоцитов и внутрипечёночных желчных протоков

2.1.4.2.1 Развитие холангиоцитов из гепатобластов
(трансформационная теория)
2.1.4.2.2 Развитие холангиоцитов из кроветворной
стволовой клетки
2.1.4.2.3 Связь между развитием внутрипечёночных
желчных протоков и сосудов печени
2.1.4.3 Звёздчатые клетки печени и их развитие
2.1.4.4 Звёздчатые клетки как компонент микроокружения для дифференцировки клеток печени
2.1.4.5 Звёздчатые макрофаги печени и их развитие
2.1.4.6 Эндотелиальные клетки синусоидов печени и их развитие
2.1.5 Влияние мезенхимы и факторов роста на развитие печени
2.1.5.1 Первичная печёночная индукция
2.1.5.2 Вторичная печёночная индукция
2.1.5.3 Влияние мезенхимы, факторов роста и транскрипционных факторов на развитие внутрипечёночных желчных протоков
2.2 Стволовая клетка печени
2.2.1 Гепатоциты как стволовые клетки печени
2.2.2 Внепечёночные стволовые клетки
2.2.2.1 Кроветворные стволовые клетки как стволовые клетки печени
2.2.2.2 Мезенхимные стволовые клетки как стволовые клетки печени
2.2.3 Внутрипечёночные стволовые клетки
2.2.3.1 Стволовые клетки фетальной печени
2.2.3.2 Стволовые клетки взрослой печени
2.2.3.2.1 Овальные клетки как стволовые клетки печени
2.2.3.2.2 Другие клетки печени, описываемые как
региональные стволовые клетки
2.2.3.2.3 Звёздчатые клетки печени как региональные стволовые клетки
3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1 Объекты исследования
3.1.1 Изучение пренатального и раннего постнатального
онтогенеза человека
3.1.2 Изучение пренатального и раннего постнатального
онтогенеза крысы
3.1.3 Изучение регенерации печени человека
3.1.4 Изучение регенерации печени крысы
3.1.4.1 Модель частичной гепатэктомии
3.1.4.2 Модель токсического повреждения печени нитратом свинца
3.1.5 Выделение и культивирование чистой популяции звёздчатых клеток печени крысы
3.2 Методы исследования
3.2.1 Депарафинирование и регидратация парафиновых срезов
3.2.2 Окрашивание гематоксилин-эозином
3.2.3 Гистохимическое выявление у-ГТП
3.2.4 Иммуноцито- и гистохимические методы
3.2.4.1 Непрямой иммунопероксидазный метод
3.2.4.2 Стрептавидин-биотиновый метод
3.2.4.3 Стрептавидин-биотиновый метод с демаскировкой антигенов в цитратном буфере
3.2.4.4 Метод меченых полимеров с демаскировкой антигенов
в цитратном буфере
2.3.4.5 Стрептавидин-биотиновый метод с демаскировкой антигенов в цитратном буфере и использованием
амплифицирующей системы CSА
3.2.4.6 Двойное окрашивание криостатных срезов печени
крысы
3.2.4.7 Двойное окрашивание парафиновых, срезов печени
крысы
3.2.4.8 Двойное окрашивание парафиновых срезов печени
эмбрионов и плодов человека
3.3 Морфометрия
4 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1 Взаимодействие эпителия передней кишки и спланхномезодермы
на ранних этапах эмбрионального развития печени человека
4.2 Фенотип звёздчатых и мезотелиальных клеток печени в пренатальном онтогенезе человека и в ходе репаративной регенерации печени крысы
4.2.1 Звёздчатые клетки в пренатальной печени человека
4.2.2 Мезотелиальные и субмезотелиальные клетки в

пренатальной печени человека
4.2.3 Экспрессия C-kit звёздчатыми клетками печени крысы в
процессе репаративной регенерации
4.3 Становление дефинитивного фенотипа эпителиальных клеток в пренатальном онтогенезе печени человека и при репаративной регенерации печени человека и крысы
4.3.1 Фенотип эпителия передней кишки и желчного пузыря в пренатальном онтогенезе человека
4.3.2 Фенотипические характеристики гепатобластов/гепато-цитов в пренатальном онтогенезе печени человека и при регенерации печени человека и крысы
4.3.2.1 Экспрессия ESA
4.3.2.2 Экспрессия цитокератина
4.3.2.3 Экспрессия цитокератина
4.3.2.4 Экспрессия ЕМА
4.3.2.5 Экспрессия десмина
4.3.2.6 Экспрессия C-kit в гепатобластах/гепатоцитах развивающейся печени человека и регенерирующей печени человека и крысы
4.3.2.7 Экспрессия C-met
4.3.2.8 Экспрессия HSA
4.3.2.9 Экспрессия CD66a
4.3.3 Фенотипические характеристики холангиобластов /холангиоцитов в пренатальном онтогенезе печени человека и при регенерации печени человека и крысы
4.3.3.1 Экспрессия СК18 клетками протоковой пластинки и холангиоцитами человека в пренатальном онтогенезе
4.3.3.2 Экспрессия СК19 клетками протоковой пластинки и холангиоцитами человека в пренатальном онтогенезе
4.3.3.3 Экспрессия ESA клетками протоковой пластинки и холангиоцитами человека в пренатальном онтогенезе
4.3.3.4 Другие маркёры, экспрессируемые клетками протоковой пластинки и холангиоцитами в пренатальном онтогенезе человека
4.3.3.4.1 Экспрессия HSA, CD66a, C-kit, С-met
4.3.3.4.2 Экспрессия ЕМА и цитокератина
4.3.3.5 Участие десмин-позитивных звёздчатых клеток печени в пренатальном развитии внутрипечёночных желчных протоков человека и крысы
4.3.3.6 Пролиферация и апоптоз клеток протоковой пластинки и желчных протоков в пренатальном онтогенезе печени человека и при репаративной регенерации печени человека и крысы
4.3.3.6.1 Пролиферативная активность клеток протоковой пластинки и желчных протоков в пренатальном онтогенезе

предполагалось независимое развитие систем внутри- и внепечёночных желчных протоков, которые изначально разобщены и сливаются на поздних стадиях развития [421].
И, наконец, существует точка зрения, согласно которой холангиоциты развиваются из стволовой клетки печени [450].
2.1.4.2.1 Развитие холангиоцитов из гепатобластов (трансформационная теория)
Доминирующей в настоящее время является трансформационная теория. Эта точка зрения сформировалась на основании данных, полученных в ходе иммуногистохимического изучения эмбрионального гистогенеза печени крыс и мышей [487]. Формирование портальных трактов сопровождалось появлением среди гепатобластов слоя клеток, дающих интенсивное окрашивание с антителами против СК8 и СК18 и расположенных на границе паренхимы и мезенхимы портальных трактов. Клетки паренхимы вокруг портальных трактов были мельче остальных гепатобластов и образовывали однослойный клеточный цилиндр, который был назван протоковой пластинкой. В последующем образовывался двухслойный цилиндр, в стенке которого формировались полости [487].
У человека, так же как и у крысы, на 8-й неделе гестации на границе между портальной мезенхимой и гепатобластами появляется цилиндрическая структура, состоящая из уплощенного кубического эпителия - протоковая пластинка, которая быстро становится двухслойной. К 12-й неделе протоковая пластинка постепенно подвергается ремоделированию: часть её клеток исчезает, другая часть мигрирует в портальную мезенхиму. Эти клетки приобретают эпителиальный мембранный антиген ЕМА и теряют билиарный гликопротеин I [59]. Трубчатые участки протоковой пластинки начинают «погружаться» в мезенхиму, окружающую воротную вену (будущий портальный тракт), но остаются соединёнными с протоковой пластинкой и ближайшей паренхимой тонкими каналами, обеспечивая сохранение просвета между портальными протоками и сетью канальцев, образованных