Вителлогении полосатой камбалы Liopsetta pinnifasciata как биомаркер эстрогенного загрязнения

• Автор: Швед, Никита Александрович
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 132 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список используемых сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Эстрогенное воздействие веществ, загрязняющих водную среду

1.1.1. Биоиндикация эстрогенных эффектов загрязнения водной среды

1.2. Вителлогенин рыб как биомаркер эстрогенного воздействия загрязнения

водной среды

1.211. Характеристика вителлогенинов костистых рыб

1.2.2. Вителлогенез и физиологическая роль различных типов
вителлогенинов у костистых рыб
1.2:3. Методы определения вителлогенинов рыб
1.2:4; Экспериментальные работы по выявлению эстрогенных свойств
некоторых загрязняющих веществ
113. Морфологические и гистопатологические маркеры эстрогенного
воздействия загрязнения водной среды
1.3.1. Интерсекс
1.3.2. Патологические изменения в органах рыб как следствие избыточного
синтеза вителлогенина
1.4. Мониторинг эстрогенной активности загрязнения водной среды в разных
странах
1.4.1. Европа
1.4.2. США и Канада
1.4.3. Восточная и Северная Азия
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА
2.1. Объект и район исследования
2.2. Выделение вителлогенина
2.2.1. Стимуляция рыб
2.2.2. Обессоливание

2.2.3. Ионообменная хроматография
2.2.4. Определение концентрации белка микробиуретовым методом
2.2.5. Ультрафильтрация
2.2.6. Гель-фильтрация
2.2.7. Электрофорез
2.3. Получение поликлональных антител кролика против вителлогенина полосатой камбалы
2.3.1. Выделение иммуноглобулинов
2.3.2. Вестерн-блоттинг
2.4. Иммуноферментный анализ
2.4.1. Определение титра антисыворотки
2.4.2. Определение концентрации вителлогенина в плазме крови камбал
2.5. Индукция синтеза вителлогенина у самцов полосатой камбалы некоторыми ксенобиотиками
26. Гистологический и морфометрический анализ
2.7. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ!
ЗЛ. Характеристика, вителлогенина полосатой камбалы L, pinnifasciata и разработка иммуноферментной, тест-системы для его количественного* определения в плазме крови
3.2. Содержание вителлогенина в плазме крови и гистопатологические изменения печени, камбал из, умеренно загрязненной акватории- Амурского залива (зал. Петра Великого Японского моря)
3.3. Влияние некоторых ксенобиотиков на синтез вителлогенина у самцов
полосатой камбалы
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Сравнение методик выделения вителлогенинов
4.2. Анализ полипептидов Vtg полосатой камбалы с молекулярной массой 180 и 98 кДа
4.3. Анализ концентрации Vtg в плазме крови и выявление гистопатологических изменений у рыб из природных водоемов

4.4. Воздействие некоторых ксенобиотиков на синтез и
гистопатологические изменения органов рыб в экспериментальных условиях.

ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

эстрадиола. Гиалиноподобный материал появлялся ; в периферийных участках печеночных долек у рыб, получивших 2x1.0 мг/кг эстрадиола, и был широко распределен по всему органу у особей, получивших наибольшее количество гормона (2х 10.0 мг/кг). Через 4 недели эксперимента: в; гепатодитах рыб выявлялось определенное количество иммуноактивного гиалина, в то время как на более поздних сроках,. иммунного ответа на антисыворотку к Vtg уже не было обнаружено. Таким; образом, уменьшение эозинофилии гепатоцитов и исчезновение гиалина на поздних сроках эксперимента свидетельствовало о том, что организм рыб способен утилизировать ненужный Vtg, а изменения в печени могут быть обратимыми, если; поступление экзоэстрогенов было однократным или недлительным (Folmar et: al., 2001).
В почках рыб гиалин аккумулировался в капиллярных клубочках гломерул.: Гиалиновые включения, как: продукт экскреции, присутствовали в различных компартментах мочесобирающих и мочевыводящих путей, в мочевом пузыре. В семенниках эозинофильный, материал откладывался; в поврежденных- сосудах; внеклеточных пространствах и капиллярах семенных канальцев. Кроме накопления; гиалина, как показателя; деструкции большого:' количества ненужного, белка, были; выявлялены и некоторые другие патологические изменения; печени - и семенников; Так, у камбал, получивших наивысшую дозу 17р-эстрадиола, была отмечена более мягкая; и хрупкая консистенция; печени. Это состояние* было обусловлено повышенным накоплением липидов»в гепатоцитах. Ядра и ядрышки были увеличены в- гепатодитах. -рыб-*, получивших эстрадиол. в дозе 2x1.0 и; 2x10.0 мг/кг массы, наиболее ярко данные, патологические изменения были:зарегестрированны через 4 недели, после первой инъекции. Для семенников было- характерно уменьшение размеров, о чем свидетельствовало снижение гбнадосоматического индекса, а во внутренней структуре этого органа присутствовали такие изменения как некроз половых клеток и увеличение внеклеточных компонентов (Folmar et al., 2001).
1.4. Мониторинг эстрогенной активности загрязнения водной среды в разных
странах-
Эстрогенный эффект некоторых ксенобиотиков, например пропил- и пропенилфенолов (Dodds, Lawson, 1937), диэтилстильбэстрола (Dodds, Lawson, 1938) и индукция синтеза Vtg у самцов рыб в ответ на экспериментальную эстрогенную