Клеточные и молекулярные особенности проявления атаксии-телеангиэктазии

• Автор: Куранова, Мирья Леонидовна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 125 с. : ил.

Оглавление

Список основных сокращений

Введение

КОбзор литературы

1 Атаксия-телеангиэктазия

2. Основные сигнальные пути в ответ на повреждения ДНК. Протеинкиназа АТМ

3. Эпигенетическая регуляция хроматина при ускоренном старении

3.1 Структура хроматина

3.2 Структура хроматина при двунитевых разрывах

3.3 Эпигенетические модификации хроматина

3.4 Посттрансляционные модификации гистонов
4.Триметилированные формы гистона НЗ - НЗК9теЗ и НЗК27теЗ при трансформации и старении клетки
5. Гистоновые деацетилазы 8Ш.Т1 и БШТб при старении клетки.,
5.1Деацетилаза БШТ!
5.2Деацетшаза БШТб
6. Ддерная ламина при старении клетки
II. Материалы и методы
1. Культивирование клеток
2. Получение первичных фибробластов
3. Иммунофлуоресценция
4. Микроскопия и анализ изображений
5. Статистическая обработка результатов
III. Результаты и обсуждение
1. Выявление фосфорилированной (активной) формы
протеинкиназы АТМ (фосфо-АТМ)
И. Выявление ферментативной активности протеинкиназ
фосфо-АТМ и АТЫ в клетках больной синдромом
Секкеля
111. Выявление ферментативной активности протеинкиназ АТМ
и АТЯ в исследуемых линиях
3.2. Интенсивность флуоресценции гистоновых деацетилаз БИТГ1 и БШТб в исследуемых линиях
3.3. Интенсивность флуоресценции триметилированных форм гистона ИЗ НЗК9шеЗ и НЗК27теЗ
3.4. Выявление гетерохроматинового маркера НР1-у
3.5. Накопление аберраций ядерной ламины
3.6.Определение количества БА-Р-галактозидазы в исследуемых линиях
3.7. Измерение длин теломер
Заключение
Выводы
Список литературы

Список основных сокращений
АТ - атаксия-телеангиэктазия
ATM - ataxia-telangiectasia mutated - мутантный ген атаксии-телеангтэктазии ATR -‘ataxia telangiectasia’ and ‘rad3-related’
BRCA1 - breast cancer type 1 susceptibility protein
DDR- The DNA Damage Response - ответ на повреждение ДНК
СХО - сестринские хроматидные обмены

MBD1 (methyl-CpG-binding protein 1) ассоциируется с H3K9 HKMT SETDB1 (Zhang, Reinberg, 2001; Martin, Zhang, 2005). Методом ChIP было выявлено, что в промоуторе генов млекопитающих метилирование по НЗК9 также участвует в репрессии эухроматиновых генов. Однако механизм данного метилирования отличен от метилирования, встречающегося в гетерохроматиновых районах. Нужно отметить, что метилирование НЗК9 и НЗК27 характерно для областей транскрипционо неактивного хроматина (Peters et al., 2003), причем модификация H3K9me3 ассоциирована со структурами конститутивного гетерохроматина (Peters et al., 2003; Rice et al., 2003), a H3K27me3 является маркером факультативного гетерохроматина (Bernstein et al., 2002; Chandwick, Willard, 2004).
Метилирование H3K27 является репрессивной модификацией, обнаруживаемой в клетке в трёх разных местах: в эухроматиновых генных локусах, преимущественно в местах реагирующих элементов Polycomb (PREs, Polycomb Repsponse Elements); в перицентромерном гетерохроматине и в неактивной Х-хромосоме у млекопитающих. Ферментом, опосредующим метилирование НЗК27 в клетках человека является EZH2, обнаруживаемый в ряде отдельных репрессивных комплексах Polycomb (PRCs). Важной функцией триметилирования НЗК27 является репрессия транскрипции. Эта модификация является взаимозаменяемой с триметилированием НЗК4, возможно, из-за пониженного родства НЗК27теЗ к SETl-like НЗК4 метилтрансферазному комплексу (Kim et al., 2013). В двухвалентных доменах хроматина большие хроматиновые регионы НЗК27 метилирования обычно являются платформой для небольших суб-регионов НЗК4 метилирования, которые подавляют гены раннего развития (Ezhkova et al.,
2011). Фосфорилированные субъединицы СВХ2, которые участвуют в поддержании баланса между самообновлением и дифференцировкой стволовых клеток, демонстрируют повышенное предпочтение к связыванию с НЗК27теЗ и НЗК9теЗ модификациями гистона НЗ (Hatano et al. 2010).