Исследование свойств субпопуляций мезенхимных стромальных клеток, различающихся по адгезии in vitro, из органов миелоидного кроветворения крысы

• Автор: Молчанова, Евгения Анатольевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 166 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Мезенхимные стромальные клетки. Биологические свойства МСК

1.1. Уникальные собенности МСК

1.2. Гетерогенность популяции МСК и её дифферон

1.3. Способы выделения МСК

1.4. Антигенный иммуннофенотип МСК

1.5. Кинетика роста и пролиферативный потенциал МСК

1.6. Потенции МСК к дифференцировке МСК

1.6.1. Остеогенный потенциал МСК

1.6.2. Адипогенный потенциал МСК
2. Особенности МСК пренатального периода развития
3. Функция создания кроветворного микроокружения МСК в пре-
и постнатальном онтогенезе
4. Теоретическое и практическое значение МСК
5. Адгезия МСК к субстрату и её влияние на свойства клеток
5.1. Особенности адгезии МСК к субстрату
5.2. Влияние адгезии на МСК
6. Влияние факторов роста на МСК in vitro
6.1. Факторы EGF, bFGF, PDGF и их влияние на рост МСК
6.2. Влияние факторов роста на потенции МСК к дифференцировке
6.2.1. Регуляция факторами роста остеогенного потенциала МСК
6.2.2. Контроль bFGF адипогенной дифференцировки МСК
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Приборы, материалы, реактивы
2.2. Культура МСК из зрелого костного мозга и эмбриональной печени
2.3. Анализ потенций МСК к дифференцировке
2.4. Иммуноцитохимический и цитофлуориметрический анализ
2.5. Статистический анализ
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Характеристика различающихся по адгезии in vitro субпопуляций МСК, из органов кроветворения крысы, зрелого костного мозга и эмбриональной печени
3.1.1. Колониеобразующая способность МСК исследуемых субпопуляций
3.1.2. Эффективность клонирования МСК в ряду субпопуляций
3.2.3. Морфологические особенности МСК субпопуляций
3.1.4 Влияние цитотоксического агента 5-фторурацила (5-ФУ) на МСК стандартных культур АС
3.1.5. Иммуноцитохимический и цитофлуориметрический анализ экспрессии поверхностных маркеров МСК субпопуляций
3.1.6. Оценка остеогенных потенций и способности к дифференцировке в костную ткань МСК субпопуляций
3.1.7. Оценка способности МСК субпопуляций к адипогенной дифференцировке
3.2. Чувствительность МСК субпопуляций из зрелого костного мозга и эмбриональной печени к факторам роста EGF, bFGF, PDGF
3.2.1. Влияние факторов роста на способность к колониеобразованию МСК субпопуляций

3.2.2. Рост клоногенных МСК субпопуляций под действием
факторов
3.2.3. Морфология клеток в колониях, образуемых МСК субпопуляций,
при действии факторов роста
3.2.4. Влияние факторов роста на остеогенные потенции МСК
субпопуляций
3.2.5. Влияние фактора роста bFGF на адипогенную дифференцировку МСК субпопуляций
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

кроветворения; а количество МСК становится максимальным во время активного гемопоэза (Van den Heuvel et al., 1987). Аналогичным образом, появление значительного количества МСК в зародышевом костном мозге предшествует появлению там кроветворных клеток (Klein et al., 1983), что свидетельствует об их тесной’ взаимосвязи в процессе индивидуального развития организма.
4. Теоретическое и практическое значение МСК
Широкие потенции к пролиферации и дифференцировке, лёгкость выделения и культивирования делают МСК привлекательным объектом для применения в клинической практике. В отличие от ЭСК, МСК не подвержены спонтанной опухолевой трансформации, их получение не связано с моральными и правовыми ограничениями; кроме того, они могут быть использованы для аутотрансплантации (Pittenger, Marshak 2001; Guo et al, 2001). В настоящее время ведётся интенсивный поиск подходов к лечению широкого ряда заболеваний с помощью МСК. Показана возможность их применения для лечения дефектов костей, хрящей (Horwitz et al., 2002), сухожилий (Young et al., 1998; Minguell et al., 2000), суставов (Alhadlaq, Mao, 2004), а также кожных и кожно-мышечных ран (Шумаков и др., 2002) и заболеваний сердца (Shake et al., 2002; Chen et al., 2004). МСК могут быть использованы и в генной терапии в качестве транспортёров генов для лечения различных генетических и онкологических заболеваний (Hou et al., 1999). Однако, для успешного использования МСК в клинической практике необходимо решить ряд серьезных проблем.
Известно, что при аллогенных трансплантациях клеток, тканей и
органов в организме реципиента развиваются такие иммунологические
феномены, как «реакция трансплантат против-хозяина» и «реакция хозяин
против трансплантата», что является одной из наиболее актуальных проблем
современной трансплантационной медицины и иммунологии. Этот феномен
обусловлен наличием у донора и реципиента разных аллельных вариантов