Мезенхимальные стволовые клетки и регионарный лимфатический узел в процессе восстановления костной ткани нижней челюсти в эксперименте

• Автор: Ковынцев, Андрей Николаевич
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 143 с. : 35 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Оглавление
Введение

Глава 1. Обзор литературы: Применение мезенхимальных стволовых

клеток для регенерации костно-суставного аппарата

1.1. Характеристика мезенхимальных стволовых клеток и их источники..

1.2. Репарация костной ткани с использованием

мезенхимальных стволовых клеток

1.2.1. Результаты использования суспензий

мезенхимальных стволовых клеток
1.2.2. Эффекты применения мезенхимальных стволовых
клеток на различных носителях
1.3. Применение мезенхимальных стволовых
клеток для регенерации суставов
1.3.1. Результаты использования только
мезенхимальных стволовых клеток
1.3.2. Данные применения мезенхимальных
стволовых клеток на разных матрицах
1.4. Клеточные технологии в стоматологии
и челюстно-лицевой хирургии
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Группы животных и сроки забора материала
2.2. Выделение аутологичных мезенхимальных стволовых клеток
2.3. Моделирование дефекта нижней челюсти и применение аутологичных мезенхимальных стволовых клеток
2.3. Объект исследования, подготовка материала к изучению, морфологические и лучевые методы исследования, морфометрия и статистическая обработка полученных данных
Глава 3. Регенерация участка повреждения кости нижней челюсти на фоне использования аутологичных мезенхимальных стволовых клеток
3.1. Участок повреждения кости нижней челюсти
в условиях естественной регенерации
3.2. Участок повреждения кости нижней челюсти после введения аутологичных мезенхимальных стволовых клеток
3.3. Радиовизиографическое исследование репаративных
процессов в участке повреждения кости нижней челюсти
Глава 4. Субмандибулярные лимфатические узлы после введения
аутологичных мезенхимальных стволовых клеток в участок повреждения кости нижней челюсти
4.1. Субмандибулярные лимфатические узлы при естественном заживлении участка повреждения кости нижней челюсти
4.1.1. Изменения структуры лимфатических узлов
4.1.2. Изменения цитограммы коркового плато
4.1.3. Изменения цитограммы центров размножения
4.1.4. Изменения численности клеток в просвете мозговых синусов..
4.2. Субмандибулярные лимфатические узлы после введения аутологичных мезенхимальных стволовых клеток
в участок повреждения кости нижней челюсти
4.2.1. Изменения структуры лимфатических узлов
4.2.2. Изменения цитограммы коркового плато
4.2.3. Изменения цитограммы центров размножения
4.2.4. Изменения численности клеток в просвете мозговых синусов..
Глава 5. Обсуждение полученных результатов
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы:
В настоящее время происходит постоянное увеличение числа больных с травматическими повреждениями и воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области. Успех восстановительного хирургического лечения травматических повреждений во многом определяется процессами репаративной регенерации костной ткани пациента. Анализ причин неудачного лечения таких больных свидетельствует о том, что пути их преодоления состоят как в усовершенствовании технологии самого хирургического вмешательства, так и в создании оптимальных условий для регенерации костной ткани.
Несмотря на развитие травматологии и ортопедии, полное восстановление костной и хрящевой ткани является проблемным, поскольку большие дефекты не могут спонтанно заживать. Использование стволовых клеток - это регенеративная биология и регенеративная медицина, являющиеся все более расширяющимися областями исследования с надеждой на успех терапевтических методов лечения ран и травм, на которые невозможно эффективно воздействовать современными хирургическими методами (Noël D. et al., 2002; Валу F.P., 2003а, 20036; Fodor W.L., 2003; Kastrinaki М.С., Papadaki H.A., 2009; Panetta N.J. et al., 2009; Dehne T. et al., 2009; David J.P. et al., 2009; Tamer el M.K., Reis R.L., 2009; Koelling S., Miosge N., 2009; Clines G.A., 2010; Galle J. et al., 2010; Chanda D. et al., 2010).
Красный костный мозг содержит прогениторные клетки (мезенхимальные стволовые клетки), способные к дифференцировке в кость, хрящ, сухожилия и другие виды соединительной ткани. Это позволяет широко применять такие клетки для ускорения регенерации костной ткани (Bruder S.P. et al., 1998а, 19986; Mackay A.M. et al., 1998; Lee K. et al., 2009; Hong D. et al., 2010; Chanda D. et al., 2010; Goldschlager T. et al., 2010; Goepfert C. et al., 2010; Peppo de G.M. et al., 2010).
После применения аутологичных мезенхимальных стволовых клеток ко-

преимуществом крыс перед другими лабораторными животными (морскими свинками, собаками, кошками, кроликами) является то, что эти животные менее специализированы, характеризуются всеядностью и высоким диапазоном условий существования. По мнению ряда авторов (Сахаров П.П. и др., 1952; Лейн-Петтер У., 1964; Западнюк И.П. и др., 1974), перечисленные свойства организма крыс могут быть весьма полезны при любых экспериментальных исследованиях.
Все манипуляции с животными осуществляли под эфирным наркозом в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». На работу получено разрешение Локального комитета по медицинской этике Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (протокол № 11 заседания Этического комитета Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН от 2008 года).
2.2. Выделение аутологичных мезенхимальных стволовых клеток
МСК выделяли, вымывая костный мозг из эпифизов бедренных костей, взятых под эфирным наркозом у самцов крыс инбредной линии Wag. Полученную суспензию клеток помещали в пластиковые флаконы («Nunk», Дания), через 48 ч после эксплантации костного мозга неприкрепившиеся клетки сливали. Прикрепившиеся клетки культивировали в среде а-МЕМ с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки («Biolot», Россия) при 37°С в С02 - инкубаторе с 5% С02 в условиях насыщенной влажности. Смену среды производили каждые три дня. При субкультивировании монослойную культуру рассевали в плотности 1000-5000 клеток/см2 (в зависимости от ростовых свойств используемой эмбриональной сыворотки), используя стандартные растворы Версена и трипсина.
Методами световой и флуоресцентной микроскопии и цитологическими методами окрашивания было показано, что культивируемые клетки костного мозга крысы: