Роль интерлейкина-2 и JAK/STAT сигнализации в экспрессии рецептора интерлейкина-2 в лимфоцитах человека

• Автор: Митюшова, Елена Викторовна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 101 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования

Цели и задачи исследования

Научная новизна исследования

Теоретическое и практическое значение работы

Список сокращений

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Иммунный ответ и роль Т-лимфоцитов

1.2. Т-клеточный рецепторный комплекс

1.2.1. Структура Т-клеточного рецептора
1.2.2. Комплекс CD3, структура и роль
1.2.3. Корецепторы CD4 и CD
1.3. Основные сигнальные события, инициируемые при активации Т-клеточного рецептора
1.3.1. Инициация сигнала с Т-клеточного рецептора, пострецепторные тирозинкиназы
1.3.2. Роль корецепторных молекул CD3, CD4 (CD8) и фосфорилирования ITAM в проведении сигнала
1.4. Основные внутриклеточные пути передачи сигнала при активации Т лимфоцитов

1.4.1. Активация фосфолипазы С и запуск 1Рз-регулируемых событий: изменение внутриклеточной концентрации ионов кальция, активация кальмодулина и транскрипционного фактора NFAT, продукция интерлейкина-
1.4.2. Активация фосфолипазы С и запуск DAG-регулируемых сигнальных событий: активация протеинкиназы 0 и транскрипционного фактора NF-кВ, экспрессия рецептора интерлейкина-
1.4.3. Роль CD28 в активации Т лимфоцитов
1.5. Рецептор интерлейкина-2 и роль интерлейкина-2 в активации Т лимфоцитов
1.5.1. Структура рецептора интерлейкина-
1.5.2. Основные сигнальные пути, инициируемые интерлейкином-
1.5.2.1. JAK/STAT путь внутриклеточной сигнализации
1.5.2.1.1. Семейство тирозинкиназ JAK, структура и роль в передаче сигнала с рецептора ИЛ-
1.5.2.1.2. Семейство белков STAT, структура и роль STAT3 и STAT5
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Выделение и культивирование лимфоцитов
2.2. Оценка экспрессии CD
2.3. Оценка пролиферативного статуса культуры лимфоцитов
2.4. Оценка жизнеспособности лимфоцитов
2.5. Приготовление клеточных лизатов
2.6. Электрофорез и иммуноблотинг

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Поверхностная экспрессия CD25 в лимфоцитах человека на разных стадиях запуска пролиферативного ответа
3.1Л. Динамика экспрессии CD25 в ЛИК, стимулированных ФГА
3.1.1.1. Влияние WHI-P131 на экспрессию CD25 в ЛПК, стимулированных ФГА
3.1.1.2. Влияние РР2 на экспрессию CD25 в ЛПК, стимулированных ФГА
3.1.2. Действие интерлейкина-2 на поверхностную экспрессию CD25 в покоящихся и компетентных ЛПК
3.2. Роль JAK/STAT-сигнализации в экспрессии CD25 в нормальных лимфоцитах человека
3.2.1. Динамика активации STAT3 и STAT5 по ходу пролиферативного ответа лимфоцитов, стимулированных ФГА
3.2.2. Динамика активации STAT3 и STAT5 при стимуляции лимфоцитов экзогенным ИЛ-
3.2.3. Роль белка STAT5 в экспрессии CD25 в активированных ЛПК человека
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
БЛАГОДАРНОСТИ

регулируется на транскрипционном уровне (Kim et al., 2006). Изначальный анализ промотерной области а-субъединицы в Т клетках линии Jurkat показал наличие NF-кВ-связывающего сайта и CarG-мотива, которые связывают NF-кВ и сывороточный фактор соответственно. Также были выявлены сайты связывания других транскрипционных белков, в том числе для димеров белка STAT5 (Lin, Leonard, 2000а; Buitenhuis et al., 2004; Kim et al., 2006).
Показано, что мыши, имеющие дефицит по ИЛ-2Ра, изначально демонстрируют нормальное лимфоидное развитие. Однако в дальнейшем у них наблюдается сильное увеличение лимфоидных органов и экспансия поликлональных Т и В клеток. С возрастом у таких мышей развивается аутоиммунность (Lin, Leonard, 2000b).
У человека ген ß-субъединицы рецептора ИЛ-2 локализован в хромосоме 22ql 1.2-12. ß-субъединица экспрессируется в покоящихся Т-клетках, но также может индуцироваться при воздействии различных митогенных стимулов (таких как форболовый эфир, фитогемагглютинин (ФГА)), а также антител к CD3 или CD28 и цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4). Экспрессия ß-субъединицы регулируется как на транскрипционном, так и на посттранскрипционном уровне. При идентификации и молекулярном клонировании в составе этого белка были выявлены области, обогащенные сериновыми остатками, функцией которых является связывание тирозинкиназы JAK1, а также богатые пролиновыми остатками, которые необходимы для «заякоривания» и активации белков STAT. Именно сигнальный путь, включающий тирозинкиназы JAK и белки STAT, является важнейшим для передачи сигнала с ИЛ-2Р (см. ниже).
Генетические нарушения, имеющие результатом отсутствие отдельных субъединиц ИЛ-2Р, интенсивно исследуются. Так, эксперименты на мышах показали, что животные с нокаутом по FUI-2Pß погибают в возрасте примерно