Молекулярно-генетическое исследование хронического миелолейкоза

• Автор: Минниахметов, Илдар Рамилевич
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 164 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ХМЛ - Хронический миелолейкоз

ИТК - Ингибитороры тирозинкиназ

кДНК - Комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота

ОТ - Обратная транскрипция

ПДРФ - Полиморфизм длины рестрикционных фрагментов

ПЦР - Полимеразная цепная реакция

ПЦР-РВ - Полимеразная цепная реакция в реальном времени

Ct - Threshold cycle (пороговый цикл)

ELN - European Leukemia Net

OR - Odds Ratio (Соотношение шансов)

95% Cl - Confidence interval (доверительный интервал)
PTPN1 - Тирозиновая фосфатаза первого типа
NF1 - Нейрофиброматоз первого типа
ABCG2 - АТФ-зависимый мембранный транспортер G2
hOCTl - Переносчик органических катионов первого типа
CYP3A5 - Цитохром Р450 класса ЗА
мкРНК - МикроРНК
РБ - Республика Башкортостан

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Цель и задачи исследования
Научная новизна исследования
Практическая значимость
Основыне положения, выносимые на защиту
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Характеристика генов BCR, ABL, BCR-ABL и их белковых
продуктов
1.2Клиническая характеристика, диагностика и особенности терапии
хронического миелолейкоза
1.3 Молекулярный мониторинг хронического миелолейкоза
1.4 Механизм резистентности у больных хроническим миелолейкозом
при лечении НТК
1.4.1 BCR-ABL-зависимый механизм устойчивости
1.4.2 BCR-ABL-независимый механизм.устойчивости
1.5 Роль протоонкогенов и генов супрессоров опухолевого роста в этиологии ХМЛ и резистентности к лечению препаратами НТК
1.6 Эпигенетическая регуляция хронического миелолейкоза
1.6.1 Митилирование
1.6.2 Роль микроРНК в развитии хронического миелолейкоза
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы исследования
2.2Методы исследования
2.2.1 Выделение геномной ДНК
2.2.2 Выделение суммарной РНК
2.2.3 Синтез кДНК с помощью реакции обратной транскрипции
2.2.4 Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК

2.2.5 Рестрикционный анализ
2.2.6 Метод электрофореза
2.2.7 Определение нуклеотидной последовательности гена ВСЯ-АВЬ
2.2.8 Количественная ОТ-ПЦР в режиме реального времени
2.2.9 Статистическая обработка результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Анализ уровня экспрессии гена ВСЯ-АВЬ в лейкоцитах
периферической крови у больных хроническим миелолейкозом из

3.2Анализ мутаций в гене ВСК-АВЬ у больных из РБ
3.3 Анализ частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов, участвующих в метаболизме ИТК, у больных хроническим миелолейкозом. Изучение уровня экспрессии химерного гена у носителей различных генотипов исследованных полиморфных локусов
3.3.1 Анализ полиморфного варианта гэ776746 гена изофермента цитохрома р450 СУРЗА5 у больных хроническим миелолейкозом
3.3.2 Анализ полиморфного варианта гб683369 гена переносчика органических катионов ИОСТ1 у больных хроническим миелолейкозом
3.4Анализ уровня экспрессии генов переносчиков лекарственных препаратов в клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови больных хроническим миелолейкозом и индивидов контрольной группы
3.4.1 Анализ уровня экспрессии гена переносчика АВСС2 в клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови больных хроническим миелолейкозом и индивидов контрольной группы

(увеличение числа копий) и активации под влиянием экзогенных промоторов, утраты отдельных аллелей и генных локусов при делениях и хромосомных перестройках, модуляции экспрессии генов на уровне транскрипции и трансляции.
Кроме онкогена BCR-ABL, который лежит в основе патогенеза XMJ1, в развитии XMJ1 в сторону прогрессирования также участвуют SRC киназы. SRC является первым из открытых онкогенов, был выявлен как трансформирующий (вызывающий рак) агент вируса саркомы Рауса (RSV), который поражает кур и прочих животных. RSV является ретровирусом. Семейство SRC киназ охватывает 9 цитоплазматических гомологов нерецепторных протеинкиназ (SRC, FYN, YES, BLK, YRK, FGR, HCK, LCK, и LIN) [Abram C.L. et al., 2000]. Некоторые SFK (SFKs-SRC family kinases) киназы экспрессируются повсеместно, другие проявляют тканеспецифичность [Abram C.L. et al., 2000]. Эксперименты с SRC доминантно-негативными мутантными клетками показывают, что SFK-белки увеличивают пролиферацию BCR-ABL экспрессирующих клеток. BCR-ABL киназа также активирует LYN, НСК, и FGR киназы [Danhauser-Riedl S. et al., 1996; Stanglmaier M. et al., 2003]. Хотя роль SFK при XMJI вызывает немало споров [Hu Y., 2004], тем не менее, сверхэкспрессия или активация НСК и LYN киназ вовлечена в прогрессирование XMJI в бластный криз и возникновение устойчивости к иматинибу [Wu J. et al., 2008]. Эти исследования показывают, что у пациентов с высокой экспрессией гена LYN необходим комбинированный лечебный подход, нацеленный как на ингибирование активности BCR-ABL, так и на LYN киназу, для преодоления этой формы резистентности к иматинибу.
Термином опухолевые супрессоры принято обозначать гены, инактивация функции которых ведет к возникновению и/или прогрессии новообразований. И, наоборот, восстановление экспрессии некоторых из таких генов в опухолевых клетках может подавить их дальнейшее размножение. Мутаторными называют гены, нарушения функции которых