Характеристика Staphylococcus aureus, выделенных от бактерионосителей, и разработка способа их санации

• Автор: Зверев, Александр Федорович
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Оренбург
• Количество страниц: 124 с. : 19 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1 Л.Особенности биологических свойств стафилококков, выделенных от бактерионосителей
1.2. Влияние антропогенных факторов на состояние
бактерионосительства
1.3. Способы санации бактерионосителей
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
2.1. Выделение и идентификация стафилококков
2.2. Методы изучения биологических свойств стафилококков
2.3. Методика определения способности S. aureus образовывать биопленки
2.4. Методика определения чувствительности S. aureus
к антибиотикам
2.5. Методики определения лактоферрина и slgA в носовом секрете
2.6. Методики определения влияния циклоферона на стафилококки
2.7. Методика санации резидентных бактерионосителей
2.8. Молекулярно-генетическое исследование штаммов стафилококков
2.9. Методики определения загрязнения атмосферного воздуха исследуемых территорий и оценки риска его
воздействия для здоровья населения
2.10. Методы статистической обработки материала
ГЛАВА 3. ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТАФИЛОКОККОВ И МЕСТНЫЙ ИММУНИТЕТ У
БАКТЕРИОНОСИТЕЛЕЙ. !
3.1. Факторы персистенции стафилококков, выделенных
у детей со слизистой оболочки переднего отдела носа
3.2. Характеристика местного иммунитета при стафилококковом

бактерионосительстве
ГЛАВА 4. ОЦЕНКА РИСКА ДЛЯ ЗДОРОВЬЯ ДЕТСКОГО НАСЕЛЕНИЯ АТМОСФЕРНОГО ВОЗДУХА ПРОМЫШЛЕННОГО ГОРОДА И СЕЛЬСКОГО
НАСЕЛЕННОГО ПУНКТА
4.1. Гигиеническая характеристика загрязнения атмосферного воздуха исследуемых территорий Оренбургской области
4.2. Оценка риска неканцерогенных эффектов
при действии загрязнителей атмосферного воздуха
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ КАЧЕСТВЕННЫХ ХАРАКТЕРИСТИК И БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ СТАФИЛОКОККОВ,
ВЫДЕЛЕННЫХ У ДЕТЕЙ, ПРОЖИВАЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИЯХ С РАЗНЫМ УРОВНЕМ АНТРОПОГЕННОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ
ВОЗДУШНОЙ СРЕДЫ
ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА СПОСОБА САНАЦИИ РЕЗИДЕНТНЫХ СТАФИЛОКОККОВЫХ БАКТЕРИОНОСИТЕЛЕЙ
6.1.Изучение влияния циклоферона на биологические свойства
S. aureus в эксперименте
6.2. Санация резидентных стафилококковых бактерионосителей циклофероном
6.3. Изучение особенностей действия циклоферона на S. aureus с использованием атомно-силовой микроскопии
6.4. Особенности санации циклофероном стафилококковых бактерионосителей, проживающих на территориях с разным
уровнем антропогенного загрязнения воздушной среды
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы
Проблема стафилококкового бактерионосительства сохраняет свою актуальность, поскольку бактерионосители являются источниками эпидемиологической опасности. В то же время важное клиническое значение стафилококкового бактерионосительства определяется типичностью процесса транслокации стафилококков со слизистых оболочек во внутреннюю среду орга-низма-хозяина с развитием широкого спектра заболеваний (Wertheim H.F. et al., 2005; van Rijen M.M., Kluytmans J.A., 2008). Условия формирования резидентного бактерионосительства связаны с наличием у резидентной стафилококковой микрофлоры особых свойств, обеспечивающих ее адаптацию к условиям, складывающимся на слизистой оболочке передних отделов носовых ходов, и таким образом, ответственных за длительное сохранение микроорганизма в данной экологической нише. Так, среди штаммов S. aureus, выделенных от резидентных бактерионосителей, установлена высокая частота встречаемости антагонистической активности в отношении широкого круга микроорганизмов (коринебактерий, микрококков и др.), являющихся представителями нормальной микрофлоры верхних дыхательных путей (Дерябин Д.Г., 2000). Показано, что у постоянных носителей резидентного типа происходит накопление наиболее вирулентных и резистентных к антибиотикам стафилококков (Терновская Л.Н., 1983; Эрдынеева Б.С., 2011), а также обладающих способностью к инактивации факторов естественной резистентности с высокими значениями признаков (Блиндер Е.А., 2005; Карташова O.J1. с со-авт., 2009).
Многочисленными исследованиями показано, что техногенные факторы внешней среды, модифицируя свойства стафилококков, способствуют формированию состояния бактерионосительства и развитию инфекционновоспалительных заболеваний (Даутов Ф.Ф. с соавт., 2007; Атаниязова P.A., 2008; Ковальчук И.Ю., 2009; Ефимова Н.В. с соавт., 2011).

измерениями; ДСЮ2 - изменение оптической плотности в контроле 2 между 1 и 2 измерениями.
Антилактоферриновую активность выражали в процентах (%) инактивации лактоферрина в опыте по сравнению с контролем, затем результат переводили в мкг/мл.
Для определения яА-протеазной активности исследуемую культуру выращивали на плотной питательной среде при 37°С в течение 24-36 часов, из выросшей агаровой культуры готовили взвесь в физиологическом растворе в концентрации 1 млрд/мл (Бухарин О.В. с соавт., 2004).
На стерильном забуферном физиологическом растворе 0,15 М pH 7,2 готовили раствор очищенного человеческого иммуноглобулина, далее полученные растворы разводили в 1000 раз стерильным буфером в соответствии с требованиями инструкции по работе с реагентами ИФА. В лунки стерильного полистиролового планшета вносили по 50 мкл микробной взвеси и раствора иммуноглобулина.
Параллельно с опытной готовили контрольную пробу, содержащую вместо микробной взвеси 50 мкл забуферного физиологического раствора. Пробы инкубировали не менее 18 часов при 37°С. Затем переносили в пластиковые пробирки и центрифугировали 8000 об/мин 20 минут при +5°С.
Отбирали необходимое количество супернатанта в пробирки, содержащие такое количество буфера, чтобы пробы были разведены в соотношении 1:50.
Далее проводили определение остаточной концентрации иммуноглобулинов в опытной и контрольной пробах с помощью иммуноферментного анализатора с использованием реагентов ЗАО «Вектор-Бест» в соответствии с инструкцией использования данных реагентов. Измерение опытной и контрольной проб проводили на фотометре, пересчет концентрации иммуноглобулинов осуществляли путем построения калибровочных графиков. Найденные по графику значения концентрации умножали на коэффициент разведения (50), и получали концентрацию иммуноглобулина в мкг/мл.