Особенности иммунного ответа, индуцированного комбинированной ДНК-белковой вакциной КомбиВИЧвак

• Автор: Ужаченко, Роман Владимирович
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 115 с. : 5 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список принятых сокращений

Введение

Научная новизна и практическая ценность работы

Основные положения, выносимые на защиту IО

Публикации и апробация работы

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ-1). Строение, геном,

жизненный цикл

1.2. ВИЧ-специфический иммунный отве т

1.2.1. Гуморальный ответ

1.2.2. Цитотоксический ответ
1.3. Современные подходы к созданию кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции
1.3.1. Вакцины против ВИЧ-инфекции, направленные на формирование гуморального ответа
1.3.2. Получение вакцин на основе ЦТЛ-эпитопов ВИЧ
1.3.3. Полиэпитопные вакцины
1.3.4. Кандидатные ДНК-вакцины
1.3.4.1. Персистенция ДНК-вакцин в организме иммунизированных животных
1.3.5. Новые способы доставки вакцин и стратегии усиления иммунного
ответа на антигены ВИЧ
1.3.6. Комбинированные вакцины
1.3.7. Вакцины против ВИЧ-1, разрабатываемые в ФГУН ГНЦ ВБ “Вектор”
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Реактивы
2.2. Протокол иммунизации и схема эксперимента
2.3. Иммуноферментный анализ
2.4. Определение количества специфических цитокинпродуцирующих клеток
в тесте ЕЫБро!
2.5. Изучение персистенции ДНК-компонента вакцины
2.5.1. Получение образцов тканей и органов
2.5.2. Выделение ДНК из тканей и органов иммунизированных животных

2.5.3. Определение количества геномной ДНК мыши в образцах органов
2.5.4. Определение количества ДНК-компонента вакцины в образцах органов
2.6. Статистическая обработка результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Оценка взаимного влияния компонентов вакцины
3.1.1. Гуморальный ответ
3.1.2. Клеточный ответ
3.2. Изучение персистенции ДНК-вакцины рсОКА-ТС1 в органах мышей, иммунизированных КомбиВИЧвак
3.2.1. Подбор условий для определения количества ДНК-компонента вакцины
в органах иммунизированных животных
3.2.2. Измерение количества геномной ДНК в образцах органов иммунизированных и контрольных животных
3.2.3. Определение числа копий плазмиды рсВЫА-ТО в органах иммунизированных животных
Заключение
Выводы
Список публикаций
Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ADE — antibody-dependent enhancement (антитело-зависимое усиление)
CD — cluster of differentiation (кластер дифференцировки)
ELISpot - enzyme-linked immunospot analysis (фермент-связанный анализ иммуноспотов) HLA - human leukocyte antigen (антигены лейкоцитов человека)
IgG - иммуноглобулин класса G
LAMP - lysosome-associated membrane protein (мембранные белки, ассоциированные с лизосомами)
МНС - major histocompatibility complex (главный комплекс гистосовмсстимости)
SIV - simian immunodeficiency virus (вирус иммунодефицита обезьян)
TBI - Т- и В-клеточный иммуноген TCI - Т-клеточный иммуноген Th - Т-хелперы
а.о. - аминокислотный остаток АГ - антиген
АЗКЦ — антителзависимая клеточная цитотоксичность АПК - антигенпрезентирующие клетки АТ - антитела
в/б - внутрибрюшинное (введение) в/м - внутримышечное (введение)
ВИЧ-1 - вирус иммунодефицита человека первого типа
ВПЧ - вирусоподобная частица
ИЛ - интерлейкин
ИС - иммунная система
ИФА - иммуноферментный анализ
н.о. - нуклеотидные основания
об/мин - оборотов в минуту
п.н. - пар нуклеотидов
п/к - подкожное (введение)
РТ-ПЦР — полимеразная цепная реакция в реальном времени СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита ЦТЛ - цитотоксические Т-лимфоциты

исследованиями ДНК-вакции на человеке [MacGregor et al., 1998]. В ранних работах по изучению ДНК-вакцин против ВИЧ-1 было показано, что плазмиды, кодирующие Env, вызывают длительный (более 6 месяцев) env-специфический гуморальный и клеточный ответ у мышей [Wang et al., 1993] и макак [Wang et al., 1995]. Плазмида, кодирующая env SIV, снижала вирусную нагрузку у макак резус при 6-тикратной ДНК-иммунизации, однако не обладала протективной активностью при инфицировании обезьян вирулентным изолятом SIVmac251 [McGregor et al., 1998]. Снижение вирусной нагрузки после ДНК-иммунизации было также показано в случае интраректального инфицирования макак.
Ранние работы по изучению ДНК-вакцин против ВИЧ-1 позволили сделать несколько важных выводов и обозначить дальнейшие направления усовершенствования технологии ДНК-иммунизации. Во-первых, ДНК-эквиваленты антигенов ВИЧ-1 и SIV индуцировали гуморальный и клеточный ответ у нечеловекообразиых приматов, но не обладали протективной активностью. Во-вторых, достаточно невысокий иммунный ответ, вызываемый ДНК-вакцинами, связан с незначительным захватом внеклеточной ДНК. Кроме того, экспрессия генов, кодируемых ДНК-вакцинами, является более низкой по сравнению с экспрессией вирусных мРНК в ходе натуральной ВИЧ-инфекции. Одним из путей решения данной проблемы является оптимизация кодоиов, наиболее часто встречающихся в клетках человека [zur Megede et al., 2000].
В более поздних работах на приматах были изучены ДПК-вакцины на основе gag-pol SIV и env89.6 и env 89.6Р ВИЧ-1. В этих исследованиях было показано, что внутривенная и ректальная ДНК-иммунизация по схеме ДНК/живой вирусный вектор, либо ДНК/ДНК (прайм/буст) сопровождается индукцией CD8+ ЦТЛ, что позволяет контролировать вирусную нагрузку после инфицирования гибридным патогенным вирусом SHIV89.6P, вызывающим гибель невакцинированных животных в течение 6 месяцев [Schell et al., 2009]. Хотя указанные вакцины не предотвращали полностью репликацию вируса, на протяжении длительного времени вирусная нагрузка оставалась на низком уровне (500-