Молекулярно-биологические свойства изолятов вируса инфекционного бронхита кур, выявленных на территории России в период с 2005 по 2011 гг.

• Автор: Овчинникова, Евгения Валерьевна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 116 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

а. о. - аминокислотный остаток

гтц- гуанидинтиоциопат

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИББ - инфекционная бурсальная болезнь кур

ИБК - инфекционный бронхит кур

ИЛТ - инфекционный ларипготрахсит птиц

ИФА - иммуноферментный анализ

кДНК - ДНК-копия с РНК-матрицы

КЭ - эмбрионы кур

мкАТ - моноклональные антитела
н. н. - нуклеотидные пары
НБ — ньюкаслская болезнь птиц
ОРС - открытая рамка считывания
ОТ-ПЦР - полимеразная ценная реакция с обратной транскрипцией
ОТ-ПЦР-РВ - обратная транскрипция и полимеразная цепная реакция в
режиме реального времени
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РДП - реакция диффузной преципитации
РЗГА - реакция задержки гемагглютипации
РИФ - реакция иммупоферментного анализа
РКЭ - развивающиеся куриные эмбрионы
PH - реакция нейтрализации
РНГА-реакция непрямой гемагглютипации
РНК - рибонуклеиновая кислота
РСО-Аланин - Республика Северная Осетия-Алаиия
РСК - реакция связывания комплемента
ТОК - трахеальная органная культура
ФБР - фосфатно-буферный раствор
эид5„ - 50%-ная эмбриональная инфицирующая доза
й1МТР - дезоксинуклеотидтрифосфаты
БРБ - свободный от специфических патогенов
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. Обзор литературы
1.1. Характеристика вируса ИБК
1.1.1. Распространение вируса ИБК в мире
1.1.2. Структура и свойства вируса ИБК
1.1.3 Устойчивость к физико-химическим факторам
1.1.4. Изменчивость вируса ИБК
1.2. Диагностика инфекционного бронхита кур
1.2.1. Молекулярные методы диагностики
1.2.2. Серологические методы диагностики
1.2.3. Выделение вируса ИБК
1.2.4. Постановка биопробы
1.3. Тииировапие вируса ИБК
1.4. Патогенез инфекционного бронхита кур
1.5. Источники и пути передачи инфекции
1.6. Профилактика ИБК
1.7. Заключение но обзору литературы
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы
2.1.1. Образцы патологического материала
2.1.2. Последовательности гена 81 вируса ИБК из данных СепВапк
2.1.3.Штаммы микроорганизмов
2.1.4. Ферменты и дсзоксииуклеозидтрифосфаты
2.1.5. Праймеры
Таблица
Структура праймеров для секвенировапия плазмиды
Таблица
2.1.6. Животные
2.1.7. Растворы, буферные смеси и ферменты

2.1.8. Среды для культивирования
2.1.9. Оборудование
2.1.10. Расходные материалы
2.2. Методы исследований
2.2.1. Выделение нуклеиновых кислот
2.2.2. ОТ-ПЦР-РВ
2.2.3. Обратная транскрипция и ГИДР
2.2.4. Очистка продуктов ПЦР
2.2.5. Секвенировапие
2.2.6. Анализ нуклеотидных и аминокислотных последовательностей
2.2.7. Выделение вируса ИБК
2.2.8. Определение титра инфекционной активности вируса
2.2.9. Оценка цилиарной активности
2.2.10. Получение рекомбинантных плазмид, несущих вставки гена 81 вируса инфекционного бронхита кур
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Разработка метода по выявлению генома вируса инфекционного бронхита кур с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
3.2. Анализ изолятов вируса ИБК, выявленных за период с 2005 но 2011 гг
3.2.1. Сравнительный анализ первичной структуры вариабельной
области гена Б1 изолятов вируса ИБК генотипа Массачусетс
3.2.2. Сравнительный анализ первичной структуры вариабельной
области гена Б1 изолятов вируса ИБК, родственных европейским штаммам
3.2.3. Сравнительный анализ первичной структуры вариабельной
области гена 81 изолятов вируса ИБК генотипа Арканзас

двухвалентной вакцины из штаммов Массачусетс и Арканзас (91, 166, 1771. Тем не менее, такая комбинация вакцин не защищает от заражения другим гетерологичным штаммом [ 167 (.
Есть данные о том, что проведение пассажей вакцинных штаммов вируса па живой птице и куриных эмбрионах приводит к единичным нуклеотидным и аминокислотным заменам. Интересно, что вакцины одного штамма, по разных серий одного или нескольких производителей, мутируют после пассажей по-разному (1431. Эти отличия свидетельствует о разных источниках оригинального вирусного штамма, полученного для производства этой вакцины, а также методах и количестве пассажей вируса, проводившихся для его аттенуации. Отличия, выявленные в разных сериях вакцины, выпущенной одним производителем, свидетельствуют о мутациях, произошедших во время репликации вирусного генома. При проведении пассажей выделенного от цыплят вакцинного вируса па куриных эмбрионах ряд выявленных изменений возвращался к исходным позициям, таким же, как в оригинальном вакцинном штамме.
Таким образом, ИБК вакцины содержат смесь генетических вариантов вируса. В результате вакцинации цыплят происходит отбор наиболее жизнеспособных субпопуляций вируса, при этом при репликации вирусного генома в нем могут происходить мутации.
Вероятно, что вакцинные препараты, содержащие смесь генетически отличающихся вирусов могут вызывать иммунный ответ, обеспечивающий защиту от более широкого спектра штаммов. Но с другой стороны, при одновременном размножении двух и более штаммов вируса в одном хозяине могут происходить рекомбинации, приводящие к появлению новых вариантов вируса, обладающих более высокой патогенностью для цыплят. В связи с этим остается важным вопросом определение гетерогенности вирусной популяции в препаратах живых вакцин против ИБК. Кроме того, интересным представляется выявление изменений, происходящих в гене Б1 вируса ИБК, при проведении пассажей вируса на цыплятах и на КЭ.