Выделение бактериофагов из бактерий Azospirillum lipoferum Sp59b и SR65 и их детекция методами электрофизического анализа

• Автор: Макарихина, Светлана Сергеевна
• Шифр специальности: 03.02.03, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 160 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Бактериофаги почвенных микроорганизмов Г лава 2. Методы детекции вирусных частиц ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Глава 3. Объекты, материалы и методы исследований

ЗЛ. Бактериальные штаммы и условия выращивания бактерий

3.2. Выделение и характеристика бактериофагов

3.2.1. Определение количества фаговых частиц

3.2.2. Определение морфологии негативных колоний

3.2.3. Определение диапазона литической активности и специфичности действия выделенных бактериофагов
3.2.4. Определение устойчивости выделенных бактериофагов к воздействию высокой температуры

3.2.5. Определение устойчивости выделенных бактериофагов к воздействию хлороформа

3.2.6. Определение устойчивости выделенных бактериофагов к изменению значений pH буферного раствора
3.2.7. Определение изменения активности бактериофагов при хранении
3.2.8. Изучение морфологии фаговых частиц с помощью электронной микроскопии
3.3. Электрооптический анализ клеточных суспензий с применением выделенных бактериофагов
3.3.1. Подготовка клеток к электрооптивескому анализу
3.3.2. Проведение электрооптического анализа клеточных суспензий
3.4. Электроакустический анализ клеточных суспензий

3.4.1. Подготовка клеток к электроакустическому анализу
3.4.2. Проведение электроакустического анализа микробных суспензий
3.4.3 Антитела
3.4.4. Взаимодействие антиген-поликлональные антитела
3.4.5. Приготовление препарата для изучения взаимодействия клеток бактерий А. ЪгаяИепэе Бр7 с антителами при помощи электронной микроскопии
РЕЗУЛЬТАТЫ ИСЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 4. Выделение и характеристика бактериофагов из АгоярігіІІит
Иро/егит штаммов Бр59Ь и 81
4.1. Выделение и характеристика бактериофага из АгоьртИит Иро/егит 8р59Ь
4.2. Выделение и характеристика бактериофага из АгоярігіПит Ііро/егит штамма 81
Глава 5. Использование метода электрооптического анализа микробных суспензий для детекции бактериофагов
5.1. Детекция бактериофагов с использованием клеток АгозрігШит Иро/егит 8р59Ь при помощи метода электрооптического анализа микробных суспензий
5.2. Детекция бактериофагов с использованием клеток Агоярігіїїит Иро/егит 81365 при помощи метода электрооптического анализа микробных суспензий
Глава 6. Использование метода электроакустического анализа микробных суспензий для детекции бактериофагов
6.1. Детекция бактериофага ФА1-8р59Ь с использованием клеток АгояртПит Иро/егит при помощи метода электроакустического анализа
6.2. Детекция бактериофага ФА1-8Я65 с использованием клеток ЛгоярігіПит Иро/егит штамма 81365 при помощи метода

электроакустического анализа
Глава 7. Исследование взаимодействия микробных клеток со специфическими поликлональными антителами при помощи резонатора с поперечным электрическим полем
7.1. Исследование взаимодействия микробных клеток А. Иро/егит Бр59Ь со специфическими поликлональными антителами при помощи резонатора с поперечным электрическим полем
7.2. Исследование взаимодействия микробных клеток А. ЬгаьИете Бр7 со специфическими поликлональными антителами при помощи резонатора с поперечным электрическим полем ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ

проложить путь к наносенсорам, способным определять человеческий папилломавирус и другие вирусы на недели раньше, чем позволяют применяемые в настоящее время методы диагностики. В отличие от поиска антител к вирусу или признаков ответа на инфицирование клеточного иммунитета сенсор, основанный на нанотрубках, определяет непосредственно вирус ВПЧ. Кроме того, для методов электрохимического обнаружения не требуется никаких химических маркеров (Huang et al., 2010; Cai et al., 2010).
Недавние исследования показали возможность использования биосенсора для детекции вирусов и бактериофагов, при этом минимальный размер определяемых частиц составляет в радиусе 24 нм (Mitra et al., 2012).
Электроакустические методы анализа привлекают все большее внимание исследователей для анализа биоспецифических взаимодействий, поскольку характеризуются высокой чувствительностью к изучаемому объекту и минимальным временем для проведения анализа. Некоторые методы основаны на использовании в качестве рецептора белка активных слоев или мембран, нанесенных на поверхность пьезоэлектрического звукопровода или резонатора (Ballantine, 1997). Так, с помощью иммобилизации соответствующих антивирусных антител на поверхности резонатора, был разработан иммуносенсор для селективной детекции вирусов герпеса в человеческой крови (Koenig and Graetzel, 1994).
Описаны также акустические методы анализа биоспецифических взаимодействий непосредственно в жидкой суспензии, контактирующей с поверхностью пьезоэлектрика. Этот подход характеризуется значительно меньшим временем детекции по сравнению с другими акустическими метсдами. Например, для резонатора с продольным электрическим полем показана возможность детекции эндотоксина (Muramatsu et al, 1989) и фибриногена (Muramatsu et al., 1988) при добавлении соответствующих реагентов, изменяющих вязкость суспензий и приводящих к сдвигу резонансной частоты.
Разработан электрохимический биосенсор для определения вируса бешенства и для выявления антигена H7N1, при этом предел обнаружения составляет 0,5 и