Влияние фито - зооэкстрактов на вирусрепродуцирующие свойства культивируемых клеток

• Автор: Хазиев, Ленар Ринатович
• Шифр специальности: 06.02.02, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 127 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИК А РАБОТЫ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Классификация культивируемых клеток животных и человека

1.1.2 Методы выращивания культур клеток животных

1.1.3 Виды контаминации клеточных культур '

1.2 Сыворотка крови - важнейший компонент питательных сред для

роста и пролиферации большинства культур клеток

1.2.1 Биохимический состав сыворотки крови животных

1.2.2 Сыворотка крови животных и культивирование клеток

1.2.3 Влияние объективных и субъективных факторов на качество
сыворотки крови для выращивания клеток
1.2.4 Роль сыворотки в адгезии и распластывании клеток на субстратах
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы и методы исследований
3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Технологические схемы получения сывороток крови и экстрактов
3.2 Физико - химический и биохимический состав сывороток крови
взрослого крупного рогатого скота и их плодов, экстрактов из мышц, остаточных сгустков крови плодов коров и
комбинированного экстракта из кабачков и мышц щуки
3.3 Кариологический анализ перевиваемых линий
клеток
3.4 Влияние экстрактов на пролиферативную активность
клеток
3.5 Влияние экстрактов в составе питательных сред на репродукцию
вирусов
4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
5 ВЫВОДЫ

6 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
8 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
9 ПРИЛОЖЕНИЯ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Новейшая биотехнология (биоинженерия) - это наука о генно - инженерных и клеточных методах и технологиях создания и использования генетически трансформированных (модифицированных) растений, животных и микроорганизмов в целях интенсификации производства и получения новых видов продуктов различного назначения.
Разработка методов культивирования клеток in vitro, освоение этих методов специалистами биофабрик позволила решить многие вопросы реального производства вирусвакцин и диагностикумов. Однако, необходимо дальнейшее совершенствование методов культивирования, получение новых культур клеток, обладающих высокой чувствительностью к вирусам, создание новых клеточных систем на основе гибридизации и генетической трансформации клеток.
Проблема поиска различных биологически активных компонентов ростовой среды для наиболее эффективного культивирования клеток в вирусологии и биотехнологии актуальна. На сегодня важнейшей составной частью питательных сред, содержащей факторы роста клеточных популяций, является сыворотка крови животных. Она остается незаменимым компонентом ростовой среды для большинства клеточных культур (Нариманов A.A., 1991; Хижняк JI.H., Ночевный В.Т., 1994; Дьяконов Л.П., Ситьков В.И., 2000; Рянский А.Л., 2001; Еремец В.И., 2011; Tayler W., 1974 и др.; Reuveny S. et al., 1986; Velez D. et al., 2006). При культивировании клеток чаще используется сыворотка крови крупного рогатого скота, но ее широкое использование ограничивается дефицитом и высокой стоимостью (Манцыгин Ю.А. и др., 1983; Хаертынов С.Х., 1982; Evege E. et al. 1985; Jayme D. et al. 1988 и др.). Для стимуляции роста клеток применяются гомо -и гетеровидовые варианты сывороток крови, обычно крупного рогатого скота, лошадей и свиней. Оптимальная концентрация сывороточного компонента в среде при этом составляет 10% (Ганиев И.М., 2007; Гурьянов Н.И., 2008).

иммуноглобулинов и их смеси). Для культивирования клеток также используют гемогидролизат - продукт ферментативного гидролиза сгустков крови КРС или человека (отходов производства у - глобулина). Для культивирования первичных
клеток в среду, состоящую из солевого раствора Хэнкса, добавляют гидролизат

сгустков крови (Сергеев В.А., Собко Ю.А., 1990). Так, при выращивании вакцинных штаммов вируса африканской чумы лошадей в суспензионных культурах ПГЖ - 666/17 к питательной среде добавляют 0,15% ферментативного гидролизата белков крови (Иванюшенкова И.В. и др., 1995). Пиотровичем В.А. (2002) разработана и утверждена нормативно-техническая документация по использованию и контролю питательной среды гемогидролизата и сыворотки крови крупного рогатого скота нативной без консерванта для культивирования клеток. В качестве белковой основы питательных сред использовался ферментативный гидролизат белков крови крупного рогатого скота из отходов производства сыворотки.
Во ВНИИВС была изучена возможность применения гемогидролизата в качестве ростовой среды для культуры клеток SPEV. Он в сочетании с 10% сыворотки КРС не влияет на рост и морфологию этих клеток, а также сроки образования монослоя в течение 10 последовательных пассажей. Добавление к среде с гемогидролизатом 50% среды 199 улучшает рост клеток SPEV (Бутко М.П. и др., 1983).
Сырьем для получения гидролизатов могут служить белки молочной сыворотки, зачастую являющейся отходом переработки молока. Исследования Федотова A.B. и соавт. (1994) выявили возможность снижения содержания сыворотки крови телят с 10 до 1% в питательной среде при выращивании перевиваемой линии клеток щитовидной железы свиньи на гидролизате сывороточных белков молока. Отечественными учеными, с целью выращивания однослойных первичных культур и субкультур клеток разработаны среды из гидролизатов белков казеина (Коренева А.И., 1995) и обрата молока. Так, почечный эпителий кроликов культивировался на гидролизате обрата молока с