Влияние полярных липидов и тритерпеновых гликозидов из морских организмов на конформацию и иммуногенность белковых антигенов тубулярных иммуностимулирующих комплексов

• Автор: Воробьева, Наталья Сергеевна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 137 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Тубулярные иммуностимулирующие комплексы

1.1.1. Прототипы тубулярных иммуностимулирующих комплексов - 1БСОМ и [БСОМАТШХ®

1.1.2. Общая характеристика тубулярного иммуностимулирующего комплекса

1.2. Физико-химические и биологические свойства полярных липидов морских макрофитов

1.2.1. Физико-химические свойства гликолипидов морских макрофитов..

1.2.2. Иммунологические свойства полиненасыщенных жирных кислот

1.3. Биологические свойства тритерпеновых гликозидов

1.3.2. Биологическая активность тритерпеновых гликозидов голотурий.

1.3.2. Тритерпеновые гликозиды дальневосточной голотурии Сиситапа ]аротса
1.4. Липид-белковые взаимодействия, конформация белков и ее связь с иммуногенностыо
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Биологические объекты
2.2. Экстракция липидов
2.3. Тонкослойная хроматография
2.4. Системы растворителей для ТСХ липидов и кукумариозидов
2.5. Обнаружение липидов и кукумариозидов
2.6. Выделение гликолипидов
2.7. Выделение фосфатидилхолина
2.8. Выделение фосфатидилэтаноламина

2.9. Анализ состава жирных кислот глико- и фосфолипидов
2.10. Определение микровязкости моногалактозилдиацилглицерина
2.11. Выделение кукумариозидов
2.12. ЯМР-спектроскопия
2.13. Получение тубулярных иммуностимулирующих комплексов
2.14. Введение антигенов в тубулярный иммуностимулирующий комплекс
2.15. Электронная микроскопия
2.16. Иммунизация животных
2.17. Получение сывороток крови
2.18. Анализ сывороток крови иммунизированных животных
2.19. Приготовление образцов для калориметрических и спектроскопических исследований
2.20. Дифференциальная сканирующая калориметрия
2.21. Флуоресцентная спектроскопия
2.22. Круговой дихроизм
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Физико-химические свойства моногалактозилдиацил-глицерина из морских макрофитов, используемого для приготовления тубулярных иммуностимулирующих комплексов
3.1.1. Жирнокислотный состав моногалактозилдиацилглицерина из морских макрофитов
3.1.2. Микровязкость моиогалактозилдиацилглицсрина из морских макрофитов
3.2. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных видов морских макрофитов на иммуногенность и конформацию порина в составе тубулярных иммуностимулирующих комплексов
3.2.1. Выбор антигенной формы порина

3.2.2. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из морских макрофитов на образование антипориновых антител
3.2.3 Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных морских макрофитов на цигокиновый профиль
3.2.4. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных видов морских макрофитов на конформацию порина
3.2.4.1. Дифференциальная сканирующая калориметрия
3.2.4. 2. Собственная флуоресценция порина
3.2.4.3. Круговой дихроизм
3.3. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных видов морских макрофитов на иммуногенность и конформацию гемагглютинина в составе тубулярных иммуностимулирующих комплексов
3.3.1. Характеристика рекомбинантного мономера гемагглютинина вируса гриппа А/НШ1 (.А/СаІІ/отіа/07/2009)
3.3.2. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных морских макрофитов на образование антител против гемагглютинина
3.3.3. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных морских макрофитов на цитокиновый профиль
3.3.4. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из различных морских макрофитов на конформацию гемагглютинина
3.3.4.1. Дифференциальная сканирующая калориметрия
3.3.4.2. Собственная флуоресценция гемагглютинина
3.3.4.3. Круговой дихроизм
3.4. Жирнокислотный состав, комплексообразующие свойства фосфолипидов из иглокожих и их влияние на иммуногенность человеческого сывороточного альбумина в составе ТИ-комплексов
3.4.1. Жирнокислотный состав фосфолипидов из иглокожих
3.4.2. Комплексообразующие свойства фосфолипидов из иглокожих

Состав липидов меняется в зависимости от таксономического положения организмов и условий их существования (Lee, 2003). Изменения состава липидов мембран при меняющихся условиях существования пойкилотермных организмов, к которым относятся морские беспозвоночные и макрофиты, необходимы для поддержания жидкокристаллического состояния липидного матрикса мембран, оптимального для их функционирования (Sanina, Kostetsky, 2002; Sanina et al., 2008). В свою очередь функционирование клеточных мембран во многом обеспечивается ассоциированными с ними белками. Поэтому изменения в липидном окружении могут влиять на конформацию мембранных белков, воздействуя на их функции как in vivo, так и in vitro, в частности на иммуногенность белковых антигенов таких искусственных липид-содержащих систем как ТИ-комплексы.
Несмотря на то, что липидный состав мембран может варьировать в зависимости от разных факторов, сохраняется амфипатическая структура их полярных липидов, неотъемлемым свойством которой является самоорганизация в водной среде в надмолекулярную структуру - бислой. Причем толщина гидрофобной середины бислоя мало различается у разных мембран (25-30 А). Поэтому в мембране, вероятно, происходит подгонка
толщины гидрофобной области к белкам. Этим объясняется зависимость константы связывания липидов бислоя от длины их жирнокислотных хвостов (Powl et al., 2007; Lee, 2011). Белок при встраивании в липидный жидкокристаллический бислой вызывает стресс в аннулярном липидном слое, так как гидрофобные области белка и бислоя имеют различную протяженность. В результате липидный ампулярный слой сжимается или растягивается, чтобы соответствовать белку (Israelachvili, 1991). Для а-спиральных мембранных белков изменение констант связывания в зависимости от длины жирных кислот оказалось значительно меньше, чем ожидалось для модели, основанной на том, что липиды искривляются вокруг