Видоспецифичный эффект производных 2,4,6-трифенилдиоксана-1,3 на конститутивный андростановый рецептор и гены глюконеогенеза

• Автор: Ярушкин, Андрей Александрович
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 116 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ядерные рецепторы

1.2. Структура ядерных рецепторов

1.3. Особенности строения CAR. Видоспецифичные характеристики

1.4. Активация ядерных рецепторов

1.5. Активация CAR

1.6. CAR в регуляции метаболизма ксенобиотиков и эндобиотиков

1.7. CAR в регуляции глюконеогенеза

1.8. CAR в регуляции липогенеза
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.2. Методы исследования
2.2.1. Синтез cTPD и его производных
2.2.2. Обработка животных индукторами
2.2.3. Выделение микросом печени животных
2.2.4. Определение каталитической активности CYP2B
2.2.5. Определение каталитической активности CYP3A
2.2.6. Приготовление лизатов из клеток печени
2.2.7. Выделение ядерных экстрактов из клеток печени крыс
2.2.8. Вертикальный электрофорез белков в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях
2.2.9. Полусухой электроперенос белков на нитроцеллюлозную мембрану
2.2.10. Иммунохимический анализ белков микросом
2.2.11. Выделение суммарной клеточной РНК и получение кДНК
2.2.12. ПЦР с детекцией в реальном времени
2.2.13. Мультиплексная ПЦР
2.2.14. Иммунопреципитация хроматина
2.2.15. Определение уровня глюкозы в крови крыс
2.2.16. Определение активация hCAR под воздействием структурных аналогов TPD
2.2.17. Наработка электрокомпетентных клеток
2.2.18. Трансформация клеток E.coli с использованием электропорации
2.2.19. Выделение плазмидной ДНК
2.2.20. Введение плазмид мышам и обработка индукторами
2.2.21. Одношаговая ОТ-ПЦР
2.2.22. Измерение активности люциферазы в печени мышей
2.2.23. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Влияние цис-2,4,6-трифенилдиоксана-1,3 на гены глюконеогенеза
3.2. Синтез производных 2,4,6-трифенилдиоксана-1,
3.3. Видоспецифичный эффект производных cTPD
3.4. Исследование активации CAR производными 2,4,6-трифенилдиоксана-1,
3.5. Исследование влияния производных 2,4,6-трифенилдиоксана-1,3 на индукцию CYP3A в печени крыс
3.6. Исследование влияния введения синтезированных соединений на экспрессию генов ферментов глюконеогенеза в печени крыс
3.7. Исследование механизма регуляции экспрессии генов глюконеогенеза под действием производных 2,4,6-трифенилдиоксана-1,
3.8. Оценка влияния хронического введения cTPD и pDMA на уровень глюкозы в крови крыс, содержащихся на жировой диете
3.9. Исследование взаимодействия синтетического лиганд-связывающего домена человеческого CAR с производными 2,4,6-трифенилдиоксана-1,3 in vitro
3.10. Исследование активации рецептора CAR человека на мышиной модели
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
CAR - конститутивный андростановый рецептор
РЕРСК - фосфоенолпируват карбоксикиназа
G6Pase - глюкозо-6-фосфатаза
CYP - цитохром Р
РВ - фенобарбитал
TPD - 2,4,6-трифениядиоксан-1,
NR - ядерный рецептор
HFD -высоко-жировая диета
PBREM - фенобарбитал-чувствительный энхансерный модуль NADPH - никотинамид динуклеотид фосфат восстановленный ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота ТСРОВОР - 1.4-бис-[2-(3,5-дихлорпиридилокси)] бензол
CITCO - 6-(4-хлорфенил) имидазо-[2,1-Ь][1,3] тиазол-5-карбальдегид-0-(3,4-дихлорбензил)оксим
cTPD - цис-2,4,6-трифенилдиоксан-1,3 tTPD - транс-2,4,6-трифенилдиоксан-1,
pDMA -N, 1Ч-диметил-4-(4,6-дифенил- 1,3-диоксан-2-ил)анилии pF - 2-(4-фторфенил)-4,6-дифенил-1,3-диоксан pN02 - 2-(4-нитрофенил)-4,6-дифенил- 1,3-диоксан рМеО - 2-(4-метоксифенил)-4,6-дифенил-1,3-диоксан

который необходим для нормальной работы цитохрома Р450. Подавляя глюконеогенез активацией CAR, гепатоциты способны сохранять необходимое количество НАДФН и поддерживать защитную функцию (метаболизм лекарств) даже при условиях дефицита энергии. Недавние исследования предполагают, что метформин ингибирует печеночный глюконеогенез у мышей в основном через регуляцию энергетического баланса в печени (Foretz et al., 2010).
Однако большинство из этих заключений основаны на исследованиях in vitro и анализе промоторов генов. Неизвестно, возможно ли применять эти результаты in vivo. Например, активация CAR имеет более сильный ингибирующий эффект на гены глюконеогенеза при высокожировой, чем при обычной диете, что говорит о выборочной пользе активации CAR при диабетический условиях. В результате, необходимы дополнительные исследования, которые покажут значение влияния физиологических условий и объяснят полученные различия в активации рецептора, включая in vivo и in vitro.
1.8. CAR В РЕГУЛЯЦИИ ЛИПОГЕНЕЗА
Избыток питательных веществ и малоподвижный образ жизни приводят к распространению ожирения, что в настоящее время является основной мировой проблемой здоровья. Основным следствием ожирения является дислипидемия, при которой наблюдается увеличение липопротеинов низкой и очень низкой плотности, и снижение концентрации липопротеинов высокой плотности, что значительно увеличивает риск кардиоваскулярных заболеваний, таких как гипертензия и атеросклероз. Ожирение является фактором риска развития холестериновых камней в желчном пузыре, что вызвано перенасыщением холестерина и кристаллизацией желчи в пузыре (Gao and Xie, 2012).
Введение агонистов CAR подавляет ожирение у мышей, индуцируемое высокожировой диетой, без влияния на потерю массы, что связано с уменьшением уровня жиров в сыворотке крови и усилением чувствительности к инсулину (Gao et al., 2009). Данный эффект CAR на ожирение был также подтвержден другими независимыми исследованиями (Hoek-van den Hil et al., 2014). Масуяма и соавторы показали, что активация CAR подавляет прирост массы беременных мышей в условиях