Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Фарафонтова, Екатерина Ивановна
03.01.03
Кандидатская
2013
Уфа
126 с. : ил.
Стоимость:
499 руб.
СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Современные антиаритмические препараты и механизмы их действия
1.2. Электрофизиологическая характеристика миокарда
1.3. Основы аритмогенного действия лекарственных препаратов
1.4. Калиевый канал Kv 11.1 (hERG)
1.5. Аитиаритмический препарат аллапинин
1.6. Оригинальное химическое соединение 5-амино-экзо-З-азатрицикло
[5.2.1.0 2'6] декан-4-он (Р11)
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Материалы исследований
2.1.1. Бактериальные штаммы и векторы
2.1.2. Стандартные водные растворы
2.1.3. Использованные реактивы и материалы
2.1.4. Моделирование аритмии in vivo
2.2. Методы исследований
2.2.1. Выделение суммарной РНК из сердца крыс
2.2.2. Синтез кДНК с помощью РНК-зависимой ДНК-полимеразы
2.2.3. Гибридизация на макрочипах
2.2.4. Анализ радиоавтографов
2.2.5. Количественная ОТ-ПЦР в режиме реального времени
2.2.6. Сайт-направленный мутагенез
2.2.7. Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК
2.2.8. Аналитический гель-электрофорез ДНК в неденатурирующих
условиях
2.2.9. Препаративный гель-электрофорез и элюция ДНК
2.2.10. Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами
2.2.11. Лигирование продуктов ПЦР
2.2.12. Подготовка компетентных клеток
2.2.13. Трансформация компетентных клеток E.coli рекомбинантной
2.2.14. Выделение и очистка плазмидной ДНК
2.2.15. Автоматическое секвенирование ДНК ферментативным методом
2.2.16. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей
2.2.17. Клеточные линии и культивирование клеток
2.2.18. Трансфекция клеток
2.2.19. Иммунофлуоресцентное окрашивание клеток
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Дифференциальная экспрессия генов в тканях сердца крыс при
однократном воздействии 5-амино-экзо-З-азатрицикло [5.2.1.02’6] декан-4-она (Р11 ) па модели аритмии in vivo
3.1.1. Гены ферментов различных метаболических путей
3.1.2. Гены белков межклеточного взаимодействия
3.1.3. Гены белков, участвующих в передаче внутриклеточных сигналов
3.1.4. Гены, кодирующие белки мембранно-связанных насосов и
транспортеров
3.1.5. Г ены белков компонентов внеклеточного матрикса
3.1.6. Гены белков различных функций
3.2. Анализ дифференциальной экспрессии генов в тканях сердца крыс
при однократном воздействии препарата аллапинин на модели аритмии in vivo
3.2.1. Гены натриевых каналов
3.2.2. Гены калиевых каналов
3.2.3. Гены кальциевых каналов
3.2.4 Гены переносчиков нейромедиаторов
3.3. Создание тест-системы для оценки влияния фармакологических препаратов на калиевый канал hERG
3.3.1. Принцип работы тест-системы для идентификации соединений с
потенциальными аритмогенными свойствами
3.3.2. Получение тест-системы для идентификации соединений с
потенциальными аритмогенными свойствами
3.3.3. Валидация тест-системы
3.3.4. Тестирование соединения Р
3.3.5. Тестирование препарата аллапинин
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
пд потенциал действия
ЭКГ электрокардиограмма сердца
вес внезапная сердечная смертность
жт желудочковая тахикардия
LQTS синдром удлиненного интервала QT
ААП антиаритмический препарат
ЭПР эндоплазматический ретикулум
ЦПМ цитоплазматическая мембрана
ЖЭА желудочковая эктопическая активность
TdP угрожающая жизни желудочковая аритмия типа “пируэт”
Р11 исследуемое соединение, производное 5-амино-З-азатрицикло -
[5.2.1.02,<1] деканона
эд эффективная доза
Т.п.н. тысяча пар нуклеотидов
ТАЕ трис-ацетатный буфер
ТЕМЕД тетраэтилметилендиамин
БСА бычий сывороточный альбумин
ДТТ дитиотрейтол
Трис трис(гидроксиэтил)аминометан
ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
LB среда Лурия-Бертани для культивирования клеток E.coli
PBS натрий-фосфатный буфер
DMEM минимально необходимая питательная среда для культивирования
клеточных культур
FBS фетальная бычья сыворотка
ММП матриксные металлопротеазы
dNTP дезоксинуклеозидтрифосфаты
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Материалы исследований 2 Л Л. Бактериальные штаммы и векторы
В экспериментах по субклонированию мутируемого фрагмента гена hERG и выделению плазмидной ДНК использовали бактериальный штамм E.coli XL 1-Blue. Получение экспрессионной конструкции проводили на основе плазмидного вектора pcDNA3.1, содержащего ген hERG (вектор любезно предоставлен профессором J. Schwarz, Германия).
2.1.2. Стандартные водные растворы
IxTAE: 40 мМ Трис-ацетат (pH 7.6), 2 мМ ЭДТА;
Среда LB: бакто-триптон (1%), дрожжевой экстракт (0.5%), NaCl (1%); Агаризованная среда LB: бакто-триптон (1%), дрожжевой экстракт (0.5%), NaCl (1%), агар (1.5%);
lxPBS: 137 мМ NaCl, 2,7мМ КС1, 10мМ№2НРО4, 1,76мМ КН2Р04, pH 7.4; Раствор Версена: 0,7 мМ ЭДТА, 137 мМ NaCl, 2,7мМ КС1, ЮмМ Na2HP04, 1,76мМ КН2Р04, pH 7.4;
2.1.3. Использованные реактивы и материалы
Ферменты:
M-Mulv обратная транскриптаза (MBI, Fermentas, США)
ДНК-лигаза фага Т4 (Fermentas, Литва)
Рестрикционная эндонуклеаза PspEl (СибЭнзим, Россия)
Рестрикционная эндонуклеаза Sbfl (Fermentas, Литва)
Набор “Tersus polymerase mix” (Евроген, Россия)
ДНКаза I (Promega,CLUA)
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Структура вируса штриховатой мозаики ячменя и гигантских бактериофагов EL и Lin68 по данным криолектронной микроскопии | Печникова, Евгения Викторовна | 2015 |
Связь транскрипции со сборкой и транспортом мРНП | Орлова, Анастасия Владимировна | 2010 |
Структура, стабильность и комплексообразование сахар-связывающих белков с лигандами. Возможность их использования в качестве чувствительного элемента биосенсорных систем на глюкозу | Фонин, Александр Владимирович | 2013 |