Восходящая экспериментальная герпесвирусная инфекция семенников и разработка способа восстановления сперматогенеза

• Автор: Малолина, Екатерина Андреевна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. ВПГ: общая характеристика

1.1. Таксономия

1.2. Строение вириона ВПГ

1.3. Репликация ВПГ

Глава 2. Развитие мужских половых клеток млекопитающих

2.1. Строение мужских половых желез - семенников

2.2. Сперматогенез. Общие положения

2.3. Периоды сперматогенеза
2.3.1. Период размножения
2.3.2. Период роста и созревания
2.3.3. Спермиогенез
2.4. Особенности регуляции иммунного ответа в семенниках.
2.5. Механизмы развития орхита
2.5.1. Иммунологические аспекты воспаления
2.5.2. Особенности инфекционных процессов в семенниках
2.5.3. Инфекции и воспаления мужского полового тракта как фактор снижения фертильности
Глава 3. Влияние ВПГ на мужскую фертильность
3.1. Герпесвирусная инфекция мужской половой системы
3.2. Экспериментальное изучение воздействия ВПГ на сперматогенез
Глава 4. Биотехнологические подходы к лечению мужского
бесплодия
4.1. Получение гаплоидных половых клеток in vitro

4.2. Трансплантации клеток в семенники с нарушенным
сперматогенезом
ДАННЫЕ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава 5. Материалы и методы
5.1. Основные реактивы
5.2. Животные
5.3. Вирус
5.4. Инфицирование семенников мышей ВИГ
5.5. Анализ локализации ВПГ и его влияния на сперматогенез
5.5.1. Быстрый культуральный метод
5.5.2. Полимеразная цепная реакция в реальном времени
5.5.3. Гибридизация in situ
5.5.4. Иммунофлуоресцентный анализ
5.5.5. Электронная и иммуноэлектронная микроскопия
5.5.6. Гистологический анализ
5.5.7. Проточная цитофлуориметрия
5.6. Трансплантации клеток семенников
5.6.1. Получение суспензии клеток семенников для трансплантаций
5.6.2. Трансплантация клеток в семенники мышей со сперматогенезом, нарушенным в результате действия химических агентов
5.6.3. Трансплантация клеток в семенники мышей со сперматогенезом, нарушенным в результате действия ВПГ
5.6.4. Анализ результатов трансплантаций
5.7. Статистический анализ результатов 61 Глава 6. Герпесвирусная инфекция семенников половозрелых
мышей in vivo
6.1. Инфекционная активность ВПГ из инфицированных гонад

6.2. Распространение ДНК ВПГ в организме инфицированных мышей
6.3. Локализация ДНК ВПГ в инфицированных семенниках
6.4. Локализация белка ВПГ в семенниках на ранних стадиях инфекции
6.5. Динамика ВПГ-инфекции в семенниках
6.6. Электронно-микроскопическая локализация ВПГ в семенниках
6.7. Воздействие ВПГ-инфекции семенников на внешний вид мышей, макроскопические показатели гонад и эпидидимальные сперматозоиды
6.8. Воздействие ВПГ-инфекции семенников на структуру сперматогенного эпителия
6.9. Развитие орхйта в ходе ВПГ-инфекции 78 Глава 7. Восстановление сперматогенеза, нарушенного действием
химических агентов, с помощью трансплантации клеток
7.1. Нарушение сперматогенеза в результате последовательного действия бусульфана и сульфата кадмия
7.2. Восстановление сперматогенеза, нарушенного действием бусульфана и сульфата кадмия
Глава 8. Восстановление сперматогенеза, нарушенного действием
ВПГ, с помощью трансплантации клеток
8.1. Выявление ВПГ в семенниках после трансплантации клеток. Воздействие ацикловира
8.2. Восстановление сперматогенеза, нарушенного ВПГ, на ранний срок после трансплантации клеток
8.3. Восстановление сперматогенеза, нарушенного ВПГ, в отдаленные сроки после трансплантации клеток
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

исследованиях применен метод nested ПЦР. В работе иранских исследователей ДНК ВПГ обнаружена методом ПЦР в 23% эякулятов от пациентов с бесплодием [85].
В России на одной выборке пациентов, страдающих бесплодием, ВПГ выявлен в половине эякулятов [2], для обнаружения вируса использован комплекс методов: иммунофлуоресценция, гибридизация in situ и др. На другой выборке по данным изучения цельных эякулятов ВПГ присутствует в 31 % случаев у пациентов с проблемами фертильности ив 17% случаев у фертильных мужчин [6]. Во фракции активно подвижных сперматозоидов ВПГ найден в 30% и в 8% эякулятов соответственно [6].
Неоднозначны также данные о влиянии ВПГ на качество спермы и бесплодие. Некоторые исследователи не находят связи между присутствием ВПГ в эякуляте и ухудшением показателей спермограммы [17; 95]. Другие отмечают снижение концентрации и подвижности сперматозоидов в эякулятах, положительных на ВПГ, а также увеличение в них содержания морфологически аномальных форм гамет [6; 9; 63; 85]. По данным работы Бочаровой и соавт. [2], в положительных на ВПГ эякулятах вирусные белки и ДНК локализованы в головках сперматозоидов, причем они присутствуют и в сперматозоидах без морфологических аномалий. Также есть данные о том, что в группе пациентов, у жен которых в анамнезе имелись спонтанное прерывание беременности и неудачи ЭКО (экстракорпорального оплодотворения), уровень инфицирования сперматозоидов ВПГ высок и составляет 81% [1].
Значительные противоречия в результатах исследований, описанных выше, связаны, по-видимому, с разной чувствительностью применяемых методов детекции вируса, с неодинаковой распространенностью ВПГ в различных странах, с различием использованных выборок пациентов [64].
Связано ли присутствие ВПГ в эякуляте с инфекцией яичек неизвестно. В то же время в литературе встречаются данные о присутствии ВПГ в органах мужского полового тракта, в том числе, в яичках [36]. Кроме того, в инфицированных ВПГ эякулятах часто увеличено число дегенерирующих незрелых