Исследование ассоциации генов-кандидатов с сахарным диабетом 1 типа и диагностическая тест-система для ранней диагностики риска развития сахарного диабета 1 типа

• Автор: Бровкина, Ольга Игоревна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 121 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БСА бычий сывороточный альбумин

ДМСО диметилсульфоксид

ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота

п.н. пара нуклеотидов

ПЦР полимеразная цепная реакция

СД сахарный диабет

ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота

single nucleotide polymorphism (однонуклеотидный ‘51" полиморфизм)

OR odds ratio (соотношение шансов)

Cl confidence interval (доверительный интервал)

лгмтг» variable numbers of tandem repeat (тандемные повторы с
VJNIjv
изменяющимся числом копии)

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Общая характеристика СД типа
1.2. Генетические факторы риска развития СД типа
1.2.1. Гены главного комплекса гистосовместимости класса II (HLA)
1.2.2. Ген проинсулина (INS)
1.2.3. Ген цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLA4)
1.2.4. Г ен адаптерного белка Lnk (SH2B3)
1.2.5. Ген рецепторов лимфоцитов (CLEC16A)
1.2.6. Ген рецептора эпидермальных факторов роста типа 3 (ERBB3)
1.2.7. Ген тирозиновой фосфатазы Т-лимфоцитов типа 22 (PTPN22)
1.2.8. Ген тирозиновой фосфатазы Т-лимфоцитов типа 2 (PTPN2)
1.2.9. Ген тирозиновой фосфатазы Т-лимфоцитов типа 11 (PTPN11)
1.2.10. Гены интерлейкина 2 (IL2) и рецептора интерлейкина 2 (IL2RÄ)
1.2.11. Другие локусы
1.3. Молекулярные механизмы возникновения аутоиммунной реакции при СД типа
1.4. Перспективы
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Реактивы и ферменты
2.2. Буферные растворы
2.3. Формирование групп больных и здоровых индивидов

2.4. Выделение геномной ДНК человека методом фенол-хлороформной экстракции
2.5. Амплификация ДНК
2.6. Электрофоретическое разделение ДНК
2.7. Амплификация ДНК “в реальном времени”
2.6. Обоснование выбора детекции нуклеотидных последовательностей для диагностической тест-системы
2.7. Анализ блоков неравновесия по сцеплению и выбор полиморфных маркеров
2.8. Статистическая обработка результатов
2.8.1. Сравнение выборок по частотам аллелей и генотипов
2.8.2. Оценка относительного риска. Odds ratio
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Общая характеристика исследованных групп
3.2. Иследование ассоциации полиморфных маркеров генов-кандидатов с СД типа
3.2.1. Подтверждение ассоциации полиморфных маркеров rs2040410 и
гs7454108 комплекса HLA с СД типа
3.2.2. Исследование ассоциации полиморфных маркеров rs41295061 и rs11594656 гена IL2RA с СД типа 1 и полиморфного маркера rs2069762 гена IL2 с СД типа
3.2.3. Исследование ассоциации полиморфного маркера rs333 гена CCR5 с СД типа
3.2.4. Исследование ассоциации полиморфного маркера rs3087243 гена CTLA4 с СД типа

поверхности все собственные антигенные детерминанты организма с помощью молекул главного комплекса гистосовместимости (МНС) класса I. Нарушение представления аутоантигенов с помощью МНС класса I как у мыши, так и у человека, приводит к возникновению аутоиммунных заболеваний [128].
К настоящему времени получено множество доказательств этого предположения. Например, проводились исследования трансгенных мышей с дефицитом “белков-спутников” или шаперонов, необходимых для сборки комплекса МНС класса I [129,130]. Они показали важность МНС класса I для обучения Т-клеток.
Исследования факторов формирования диабета у мышей линии NOD привели к нахождению мутации в промоторе гена Lmp2, кодирующего одну из субъединиц иммунопротеосомы и расположенного в области МНС класса
II. В результате резко снижалась его экспрессия, что приводило к прекращению деградации протеосомами собственных белков для представления на МНС класса I. Соответственно толерантность Т-лимфоцитов к этим белками не развивалась [131].
Таким образом, одним из важнейших механизмов возникновения аутоиммунных заболеваний и в частности СД типа 1 является нарушение представления собственных антигенов организма Т-лимфоцитам и восприятия ими этого сигнала.
В том случае, если сигнал с рецептора о наличии антигена в комплексе с МНС класса I (т.е. собственного антигена) был воспринят Т-клеткой, она начинает процесс апоптоза. В данном случае речь может идти об “апоптозе по команде”, индуцированном извне. Схема принятия решения об апоптозе чрезвычайно сложна и включает в себя несколько многоступенчатых процессов регуляции. Нарушения в каждом из этих процессов могут приводить к остановке апоптоза на ранней стадии.