Разработка экспресс-системы скрининга ингибиторов вируса иммунодефицита человека (HIV-1) дикого типа и мутантных лекарственно-устойчивых форм

• Автор: Прокофьева, Мария Михайловна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 140 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Введение

1. Строение и жизненный цикл ШУ

1.1. Строение ШУ

1.2 Жизненный цикл НП

1.3. Ферменты ШУ-1: структура и механизм действия

1.3.1 Обратная транскриптаза

1.3.2 Протеаза

1.3.3 Интеграза

2. Ингибиторы ШУ
2.1 Нуклеозидные и нуклеотидные ингибиторы ОТ ШУ
2.2 Ненуклеозидные ингибиторы ОТ НІУ
2.3 Ингибиторы интегразы ШУ
2.4 Ингибиторы протеазы ШУ
2.5 Ингибиторы проникновения вируса в клетку
2.6. Сульфатированные полисахариды
2.7 Высооактивная антиретровирусная терапия
3. Лентивирусные векторы
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материалы
1. Клеточные линии
2. Плазмиды
3. Реактивы

4. Пластиковая посуда, другие материалы
5. Оборудование
Методы
Культивирование клеток
Пересев клеток
Криоконсервация клеток
Приготовление бактериальных культуральных сред
Трансформация компетентных бактериальных клеток E.coli DH5-0C
Получение псевдо-HIV-1 частиц, несущих маркёрный ген зеленого флуоресцентного белка (eGFP)
Определение титра псевдо-HIV -1 частиц
Трансдукция прикреплённых клеток псевдо-HIV-1 частицами
Трансдукция суспензионных клеток псевдо-HTV-l частицами
Проточная цитофлуориметрия
Определение цитостатичности и цитотоксичности исследуемых соединений
Определение количества клеток, находящихся на ранних стадиях апоптоза
Исследование антивирусной активности соединений
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Характеристика системы
2. Выбор белка оболочки для лентивирусных частиц
3. Нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы HTV
3.1 Азидотимидин
3.2 Действие азидотимидина на лекарственно-устойчивые формы ОТ
3.3 Ламивудин (ЗТС)
3.4 Ставудин (d4T) и другие нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы
4. Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы HIV
4.1 Невирапин
4.2 Действие невирапина на лекарственно-устойчивые формы ОТ
4.3 Эфавиренз
5. Исследование новых ненуклеозидных ингибиторов ОТ
6. Ингибиторы интегразы HIV
6.1 Ралтегравир и L-731
6.2 Действие ралтегравира на лекарственно-устойчивые формы интегразы
7. Сульфатированные полисахариды как ингибиторы проникновения вируса в клетку
8. Получение псевдо-HIV-1 частиц, несущих гены различных флуоресцентных белков
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ

расстоянии 5 пар оснований друг от друга (стадия А). Второй шаг, называемый “переносом цепи”, заключается в образовании ковалентных связей между процессированными 3’-концами провируса с 5’-концами клеточной ДНК (стадия В). После этого клеточные ферменты застраивают образовавшиеся бреши и лигируют цепи (стадия С).
УАСТС — £*573.’ йьОЫА
ЗТСАС-

9'АСге
но АС

I I I I I *~* Нитап ОМА

1шЦ§=====£*тггтт:

Рисунок 10. Схема интеграции провирусной ДНК в клеточный геном.
2. Ингибиторы 111V -1.
Создание подходов к терапии ШУ-инфекции представляло одну из наиболее важных задач медицинской химии с самого момента открытия вируса. Фактически любые стадии клеточного цикла вируса рассматривались как потенциальные мишени для создания противовирусных препаратов. Большинство существующих в настояшее время лекарств направлено на подавление двух ключевых стадий развития инфекции: синтеза провирусной ДНК, катализируемого ОТ и протеолитического процессинга первичных полипептидов, образующихся при экспрессии вирусных генов, что осуществляется протеазой вируса. Сравнительно недавно появились новые антиретровирусные препараты, блокирующие и другие стадии клеточного