Анализ маркеров вируса простого герпеса у недоношенных новорожденных детей с признаками внутриутробной инфекции

• Автор: Гаджиева, Замира Сайпудиновна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 141 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Вирусы простого герпеса 1 и 2 типов: структура, репродукция и репликация вируса в клетке.

1.1. Структура и организация генома вирионов ВПГ

1.2. Репродукция ВПГ в клетке

Глава 2. Инфекция, вызываемые ВПГ 1 и 2 типов.

2.1. Герпесвирусная инфекция у беременных женщин

2.2. Значение ВПГ в развитии ВУИ у недоношенных детей

2.3. Лечение герпесвирусной инфекции у новорожденных детей

Глава 3. Лабораторная диагностика герпесвирусной инфекции.

3.1. Культуральный метод
3.2. Полимеразная цепная реакция
3.2.1. ПЦР «в реальном времени»
3.2.2. ПЦР «in situ»
3.3. Иммуноферментный анализ
3.4. Заключение 47 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава 4. Материалы и методы.
4.1. Список основных реактивов и препаратов, использованных в работе
4.2. Культура клеток
4.3. Вирус
4.4. Определение инфекционной активности вируса
4.5. Пациенты
4.6. Клинический материал
4.7.Пробоподготовка
4.8. Быстрый культуральный метод
4.9. Твердофазный иммуноферментный анализ
4.10. Определение авидности антител
4.11. Полимеразная цепная реакция
4.12. Полимеразная цепная реакция «в реальном времени»
4.13. Полимеразная цепная реакция «in situ»
4.14. Анализ интерферонового статуса
4.15. Характеристика используемого препарата
4.16/Статистическая обработка данных
Глава 5. Выявление маркеров ВПГ 1 и 2 типов у недоношенных новорожденных детей с признаками ВУИ.
5.1. Частота обнаружения маркеров ВПГ у новорожденных детей
5.1.1. Сравнительный анализ частоты выявления маркеров ВПГ в клинических материалах
5.1.2 Частота обнаружения маркеров ВПГ-инфекции у новорожденных детей методами серодиагностики
5.2. Динамика выявления прямых маркеров ВПГ у недоношенных детей в течение первого года жизни
Глава 6. Анализ интерферонового статуса недоношенных новорожденных детей с ВПГ-инфекцией. Оценка эффективности включения Виферона в комплексное лечение недоношенных детей.
6.1. Количественный анализ уровней ИФН-а и ИФН-у
у новорожденных детей
6.2. Влияние Виферона на комплексное лечение ВУИ у недоношенных новорожденных детей
Глава 7. Комплексное лабораторное обследование беременных женщин с отягощенным акушерско-гинекологическим анамнезом с целью выявления ВПГ-инфекции.
7.1. Выявление прямых маркеров ВПГ

7.1.1. Частота обнаружения ДНК ВПГ в клинических материалах
7.1.2. Сравнительное изучение выявления прямых маркеров ВПГ в клиническом материале методами ПЦР, ПЦР-рв и БКМ
7.2. Выявление серологических маркеров ВПГ у беременных женщин
7.3. Динамика маркеров ВПГ-инфекции у женщин в течение беременности
7.4. Оценка состояния новорожденных детей, родившихся
от матерей с ОАГА
Глава 8. Разработка модифицированного метода ПЦР in situ. Выявление ДНК ВПГ методом ПЦР in situ в клетках аутопсийного материла от
мертворожденных детей.
8.1. Разработка и модификация метода ПЦР in situ на культуре клеток Vero
8.2. Выявление маркеров ВПГ в материалах аутопсии мертворожденных детей
8.3. Сравнение частоты выявления маркеров ВПГ методами БКМ,
ПЦР и ПЦР in situ
8.3.1. Анализ частоты обнаружения ДНК ВПГ в аутопсийном материале методами ПЦР и ПЦР in situ
8.4. Частота выявления ВПГ в различных органах мертворожденных детей
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Стремительное развитие научных технологий меняет диагностическую ценность привычных методов. В настоящее время для диагностики и контроля за течением ГВИ все более важными представляются методы, основанные на идентификации вирусного генома, хотя сохраняют свою ценность культуральные методы, а также методы иммуноферментного и иммуногистохимического анализа.
В настоящее время существуют разнообразные методы лабораторной диагностики ГВИ. Некоторые из методов известны давно и широко используются, некоторые появились недавно и уже активно применяются. Все методы можно подразделить на несколько групп:
1. Вирусологические;
2. Молекулярно — биологические;
3. Иммунохимические;
4. Цитологические;
5. Электронномикроскопические;
Электронная микроскопия. С помощью этого метода можно обнаружить собственно сам вирус по морфологии его структуры. Для успешного определения вируса его концентрация в пробе должна быть примерно ГЮ10 частиц в 1мл. Но поскольку концентрация возбудителя, как правило, в материале от больных незначительна, то поиск вируса затруднен и требует предварительного осаждения и концентрации. Кроме того, этот метод не позволяет типировать герпесвирусы, так как у многих из них нет морфологических различий внутри семейства. В связи с этими причинами, а также из-за относительной длительности постановки и необходимости дорогостоящего оборудования этот метод редко используется в
диагностической практике.
Цитологический метод. Метод заключается в обнаружении в исследуемом материале инфицированных клеток на цитологическом препарате. Их идентифицируют как многоядерные гигантские клетки с внутриядерными включениями. Несмотря на доступность и простоту,