Изучение генетической предрасположенности к атопической бронхиальной астме с использованием полиморфных маркеров генов-кандидатов

• Автор: Дмитриева-Здорова, Елена Викторовна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 125 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГМ-КСФ

п.н.
ПДРФ

хозл
3-НРА

dATP
dCTP
ddNTP
dGTP
dNTP
dTTP

бронхиальная астма
колониестимулирующий фактор гранулоцитов и макрофагов Дальтон
дезоксирибонуклеиновая кислота
интерлейкин
интерферон
многофакторное заболевание
липополисахарид
пара нуклеотидов
полиморфизм длин рестрикционных фрагментов полимеразная цепная реакция трис-ацетатный буфер ультрафиолетовый свет фактор некроза опухоли
хроническое обструктивное заболевание лег ких 3-гидроксипиколиновая кислота confidence interval (доверительный интервал) 2’-дезоксиаденозинтрифосфорная кислота 2 ’-дезоксицитидинтрифосфорная кислота дидезоксинуклеотидтрифосфорная кислота 2’- дезоксигуанозинтрифосфорная кислота 2’-дезоксинуклеотидтрифосфорная кислота 2’-дезокситимидинтрифосфорная кислота иммуноглобулин Е
odds ratio (показатель соотношения шансов) однонуклеотидный полиморфный маркер

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Однонуклеотидные полиморфные маркеры (БИР). Использование полиморфных маркеров в исследовании генетики многофакторных заболеваний
1.2. Масс-спектрометрия МАЦЛ-ТОБ
1.2.1. Основные принципы
1.2.2. Применение масс-спектрометрии МЛЬГЛ-ТОР для анализа Б1ЧР
1.3. Атопическая бронхиальная астма (БА)
1.3.1. Основы патогенеза атопической БА
1.3.2. Генетические факторы развития БА
1.4. Характеристика исследованных в работе генов и полиморфных маркеров
1.4.1. Ген интерлейкина-13 (1ЫЗ)
1.4.2. Ген интерлейкина-5 (Д5)
1.4.3. Ген альфа-цепи рецептора интерлейкииа-8 (/Г5ДЛ)
1.4.4. Ген ФП-подобного рецептора 4 (Т1Я4)
1.4.5. Ген поверхностного антигена 4, ассоциированного с цитотоксическими Т-лимфоцитами (СТ1А4)
1.4.6. Ген в-белка, ассоциированного с астмой (СРЯА)
1.4.7. Ген эотаксина-3 (ССХ26)
1.4.8. Ген регулятора активности нормальной экспрессии и секреции
Т-клеток (СС15)
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Формирование групп больных и здоровых индивидов
2.2. Генотипирование
2.2.1. Амплификация ДНК
2.2.2. Электрофоретическое разделение ДНК
2.2.3. Добавление щелочной фосфотазы
2.2.4. Реакция удлинения праймеров
2.2.5. Очистка продуктов реакции удлинения праймеров
2.2.6. МАЫЛ-ТОГ МБ измерения
2.3. Статистическая обработка результатов
2.3.1.Сравнение выборок по частотам аллелей и генотипов. Точный критерий Фишера

2.3.2. Оценка относительного риска. Показатель соотношения шансов
(Odds ratio, OR). Доверительный интервал
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Изучение ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов
с атопической Б А
3.1.1. Исследование ассоциации полиморфных маркеров С(-1055)Т и R130Q
гена IL13 с атопической БА
3.1.2. Исследование ассоциации полиморфного маркера С(-703)Т
гена IL5 с атопической БА
3.1.3. Исследование ассоциации полиморфных маркеров M31R и R335C
гена IL8RA с атопической БА
3.1.4. Исследование ассоциации полиморфного маркера Asp299Gly
гена TLR4 с атопической БА
3.1.5. Исследование ассоциации полиморфных маркеров С(-318)Ти A(+49)G
гена CTLA4 с атопической БА
3.1.6. Исследование ассоциации полиморфных маркеров rs324396 и rs740347
гена GPRA с атопической БА
3.1.7. Исследование ассоциации полиморфного маркера T{+2497)G
гена CCL26 с атопической БА
3.1.8. Исследование ассоциации полиморфного маркера А (-403)G
гена CCL5 с атопической БА
4. ВЫВОДЫ
5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

4) (Hirano et al., 1984). Современное обозначение данного цитокина - интерлейкин-5. Интерлейкин-5 (ИЛ-5) играет значительную роль в аллергических реакциях и провоспалительных процессах.
ИЛ-5 - гомодимерный гликопротеин с молекулярной массой 45-60 кДа, который имеет третичную кристаллическую структуру, состоящую из 4 а-спиралей (Milbum et al., 1993). Как и в случаях с цитокинами ИЛ-2 и ИЛ-4, вариабельность ИЛ-5 связана с разной степенью гликозилирования белка, синтезируемого в различных типах клеток. Мономерная и димерная формы ИЛ-5 обладают сходной функциональной активностью. Изучение полной нуклеотидной и аминокислотной последовательности ИЛ-5 мыши и человека выявило высокую степень гомологии, равную 77% и 70%, соответственно (Azuma et al., 1986). Функциональный рецептор ИЛ-5 (IL-5R) представляет собой гетеродимерный комплекс, состоящий из полипептидной а-субъединицы (aIL-5R; MW 60Kd) и (3-субъединицы ((3IL-5R; MW 130Kd), также входящей в состав рецепторного комплекса к ИЛ-3 и ГМ-КСФ (Lopez et al., 1991; Murata et al., 1992; Miyajima et al., 1993). In vitro, было установлено, что а-субъединица человека экспрессируется на эозинофилах и базофилах, в то время как [3-субъединица экспрессируется более широко (Denburg et al., 1991; Migita et al., 1991; Miyajima et al., 1993). aIL-5R обеспечивает специфическое взаимодействие с лигандом, при этом (3IL-5R повышает аффинность связывания (Takagi et al., 1995).
ИЛ-5 продуцируется Т-хелперами 2-го типа, стимулированными митогеном или антигеном, а также тучными клетками (Noma et al., 1986; Lee et al., 1986; Severinson et al., 1987). Нестимулированные клетки не экспрессируют ген IL5, и синтеза цитокина не происходит. ИЛ-5 является ответственным за регуляцию пролиферации, дифференцировки, активации и направленной миграции зозинофилов, которые, в свою очередь, провоцируют развитие воспаления, приводящего к обструкции и гинерреактивности дыхательных путей (Campbell et al., 1987; Lopez et al., 1988). Также ИЛ-5 повышает жизнеспособность эозинофилов in vivo и in vitro (Hogan, 2007). Показано, что антитела к ИЛ-5 блокируют эозинофильное воспаление и снижают гиперчувствительность бронхов (Greenfeder et al., 2001).
ИЛ-5 играет важную роль в дифференцировке В-лимфоцитов, активированных специфическим антигеном или митогеном (Takatsu et al., 1988). Усиление пролиферации В-клеток под влиянием данного цитокина во многом связано с его способностью индуцировать экспрессию (3-цепи рецептора к ИЛ-2 на этих клетках (Nakanishi et al., 1990). Также ИЛ-5 значительно усиливает продукцию иммуноглобулинов IgM, IgG, IgE активированными В-клетками (Takatsu et al., 1988).