Исследование процессов репликации и транскрипции митохондриальной ДНК клеток крови мышей при рентгеновском облучении

• Автор: Евдокимовский, Эдуард Владимирович
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 102 с. : ил.

Содержание:

Список использованных сокращений:

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Митохондрии обладают собственным генетическим

аппаратом

1.2 Структура мтДНК

1.3 Транскрипция мтДНК

1.3.1 Продукты транскрипции мтДНК

1.3.2 Механизм транскрипции и цис-действующие элементы

1.3.3 Процессинг и созревание РНК

1.3.4 Факторы транскрипции
1.4 Репликация мтДНК
1.4.1 Ферменты репликации
1.5 Роль митохондрий в апоптозе
1.5.1 Апоптоз и митохондриальная пора
(permeability transition pore)
1.6 Повышенный уровень повреждения мтДНК в норме
и при окислительном стрессе
1.7 Форменные элементы крови
1.7.1 Необычная роль митохондрий в процессе жизнедеятельности
нейтрофилов и эозинофилов
2. Материалы и методы
2.1 Лабораторные животные
2.2 Рентгеновское облучение
2.3 Проточная нитометрия
2.4 Выделение митохондрий из печени мышей
2.5 Выделение ДНК
2.5.1 Выделение ДНК из форменных элементов крови
2.5.2 Выделение ДНК из сыворотки крови
(сорбция на магнитных сорбентах)
2.5.3 Выделение ДНК из митохондрий
2.6 Выделение РНК
2.7 Обработка РНК ДНК-азой

2.8 Обратная транскрипция
2.9 ПЦР в реальном времени
2.10 Электрофоретическое разделение фрагментов ДНК
в агарозном геле
2.11 Электрофоретическое разделение фрагментов ДНК
в полиакриламидном геле
2.12 Визуализация фрагментов ДНК в полиакриламидном геле
при окрашивании нитратом серебра
3. Результаты исследований и обсуждение
3.1 Количественная оценка числа копий мтДНК и ее транскриптов в ядросодержащих клетках крови контрольных мышей
3.1.1 Определение количества копий мтДНК в ядросодержащих клетках крови контрольных вышей
3.1.2 Исследование процессов транскрипции митохондриальных генов в клетках крови контрольных мышей
3.2 Функционирование митохондриального генетического аппарата в ядросодержащих клетках крови при облучении мышей в дозе 1 Гр
3.2.1 Популяционный состав ядросодержащих клеток крови при облучении мышей в дозе 1 Гр
3.2.2 Кшшйность мтДНК в клетках крови контрольных и облученных
в дозе 10 Гр мышей
3.2.3 Количество митохондриальных и ядерных фрагментов в сыворотке контрольных и облученных в дозе 1 Гр мышей
3.2.4 Исследование процессов транскрипции митохондриальных генов в клетках крови облученных в дозе 1 Гр мышей
3.3 Исследование нарушения функционирования митохондриального генома в крови мышей, облученных в дозе 10 Гр
3.3.1 Радиационно-индуцированное изменение популяций ядросодержащих клеток крови мышей
3.3.2 Копийность мтДНК в клетках крови облученных в дозе 10 Гр мышей
3.3.3 Исследование процессов транскрипции митохондриальных генов в клетках крови облученных в дозе 10 Гр мышей
3.3.4 Количество митохондриальных и ядерных фрагментов в сыворотке контрольных и облученных в дозе 10 Гр мышей
3.3.5.Отношение мтДНК/яДНК как возможный показатель клеточной гибели
4. Заключение
5. Выводы
6. Список литературы:

потенциала наблюдается в нейтрофилах - одной из самых многочисленных популяций ядерных клеток крови (см. ниже).