Комплексный анализ норадреналинового транспортера человека (чНАТ) в качестве репортерного гена для молекулярной визуализации биологических процессов в злокачественных новообразованиях : экспериментально-клиническое исследование

• Автор: Мороз, Максим Аркадьевич
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Свойства, физиология и фармакология норадреналинового транспортера

1.2. Изучение белка HAT, как участника широкого спектра клинически значимых процессов в неврологии, кардиологии и онкологии
1.2.1. Роль белка HAT в физиологии центральной нервной системы и патофизиологии нарушений ее функции
1.2.2. Роль белка HAT в физиологии сердечно-сосудистой системы и патофизиологии нарушений ее функции
1.3. Комплекс методов молекулярной визуализации, их клиническое и лабораторное значение. Стратегии визуализации. Оптическая и ядерная визуализация. Разработка новых репортерных генов и подходов к их применению в клинической практике
1.3.1. Молекулярная визуализация в лабораторной и клинической практике. Развитие, формирование, значение
1.3.2. Стратегии методов молекулярной визуализации. Прямая и опосредованная визуализация. Принципы различных видов визуализации. Формирование концепции репортерных генов, как одного из вариантов визуализации
1.3.3. Ядерная визуализация. Однофотонная томография. Позитронно-эмиссионная томография. Репортерные гены для ядерной визуализации
1.3.4. Оптическая визуализация. Флуоресценция и биолю-минесценция. Репортерные гены для оптической визуализации
1.3.5. Классические клинические методики в комплексе методов молекулярной визуализации. Ядерно-магнитный резонанс, компьютерная томография, ультразвуковые исследовании
1.3.6. Перспективы использования репортерных генов в лабораторной и клинической практике

1.4. Роль норадреналина (НА) в комплексе методов молекулярной визуализации. Клинические перспективы
1.4.1. Использование человеческого транспортера норад-репалииа для неинвазивной молекулярной визуализации биологических процессов
1.4.2. Клинические перспективы
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Объект исследования
2.2. Создание химерного репортерного гена hNET-IRES-GFP
2.3. Клеточные линии
2.4. Проточная цитофлуорометрия (FACS). Анализ и сортировка
2.5. Флуоресцентная микроскопия
2.6. Иммуноблот анализ
2.7. Модели подкожных опухолей у экспериментальных животных
2.8. Чрезкожная (поверхностная) визуализация флуоресценции.
2.9. Анализ захвата [1231] МИБГ и [1241] МИБГ культурами клеток in vitro
2.10. Синтез радиоактивных маркеров
2.11. Визуализация и количественная оценка захвата радиоактивной пробы с помощью гамма-камеры и позитронно-эмиссионной томографии
2.12. Статистический анализ
Глава 3. Создание экспериментальных клеточных линий, несущих чНАТ-содержащий химерный ген. Анализ экспрессии и функции чНАТ в этих линиях
Глава 4. Создание in vivo экспериментальных моделей с подкожными опухолями, образованными из чНАТ-положительных клеточных линий и их обследование на однофотонном и позитронно-эмиссионном томографах. Независимое определение экспрессии химерного гена у экспериментальных животных с помощью неинвазивной оптической визуализации
4.1. Обследование мышей линии nude на однофотонном томографе/ гамма-камере

4.2. Обследование экспериментальных животных с помощью позитронно-эмиссионной томографии
4.3. Анализ распределения [1241]МИБГ в организме экспериментальных животных после системного введения
Глава 5. Использование чНАТ репортерных систем для визуализации различных патофизиологических процессов в клетках экспериментальных опухолей
5.1. Применение чНАТ репортерных систем для визуализации пролиферации опухл ей
5.2. Использование чНАТ репортерных систем для визуализации метастазирования опухолей
Заключение
Выводы
Список литературы

вами. К ним относятся такие белки, как ТурбоЗВБ (ТигЬоОБР, ген клонирован из РоШеІІіпа ріитаіа); ЖФБ (ТР) - желтый флуоресцирующий белок (ген клонирован из РкіаШіит яр.), а также ряд других белков, флуоресцирующих в красной части спектра [Уи X., аі аі., 2010].

Рис. 7. Пример флуоресцентой визуализации нескольких проб одновременно, для детекции мембраны (зеленый), ядра (синий) и цитоплазмы (оранжевый) клеток нервной системы
Принципиальное значение в лабораторной практике, особенно для условий in vivo, имеет биолюминесцентная визуализация. Это привело к разработке в последние 20 лет десятков новых систем на основе множества различных белков - Люциферов. Основные из используемых на данный момент биолюминесцентных систем включают в свой состав ферменты, характерные для светлячков сем. Lampyridae и морских простейших Renilla reniformis, сем. Renillidae. Разработано ещё несколько новых систем на основе ферментов рыб (Aequorea), моллюсков