Исследование механизмов действия УФ-света и различных препаратов α-интерферона на структурно-функциональное состояние компонентов T- и B- клеточного звена иммунитета человека

• Автор: Вдовина, Вера Александровна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 177 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,

СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Краткая характеристика Т- и В-лимфоцитов

1.1.1. Морфологические особенности лимфоцитов

1.1.2. Строение мембран лимфоцитов

1.1.3. Происхождение Т- и В-клеток

1.1.4. Функциональные особенности и основные мембранные маркеры

Т- и В-лимфоцитов
1.2. Структура, физико-химические свойства и функции
антигенраспознающих рецепторов Т- и В- лимфоцитов
1.2.1. Антигенраспознающий рецепторный комплекс Т-лимфоцитов
1.2.2. В-клеточный антигенраспознающий комплекс
1.3. Структура, физико-химические свойства и функции СБ95 (Еаз/АРО-1) рецептора
1.4. Краткая харак теристика УФ-излучения и его влияние на структурно-функциональное состояние компонентов иммунной системы
1.5. Характеристика интерферонов
1.5.1. Свойства и классификация интерферонов
1.5.2. Современные данные о структуре молекул интерферонов
1.5.3. Механизм взаимодействия интерферона с клеточной мембраной
и его противовирусное действие
1.5.4. Влияние интерферона на функциональные свойства
иммунокомпетентных клеток и экспрессию мембранных маркеров
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследования

2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение лимфоцитов из крови доноров
2.2.2. Разделение лимфоцитов на Т- и В-популяцни
2.2.3. Определение жизнеспособности лимфоидных клегок
2.2.4. Облучение суспензий лимфоцитов УФ-светом
2.2.5. Модификация лимфоцитов различными препаратами ос-интерферона
2.2.6. Комбинированное действие УФ-излучения и человеческого лейкоцитарного а-интерферона на Т-клетки
2.2.7. Исследование уровня экспрессии некоторых мембранных маркеров на поверхности Т-лимфоцитов методом лазерной проточной цитофлуориметрии
2.2.8. Использование метода иммуноферментного анализа для определения уровня экспрессии некоторых мембранных маркеров на поверхности
Т- и В-лимфоцитов крови человека
2.2.9. Исследование синтеза CD3 комплексов, CD4, CD8, CD95 маркеров de novo Т-лимфоцитами крови человека
2.2.10. Изучение структурных свойств мембран Т-лимфоцитов с помощью метода иммунофлуоресценции
2.2.11. Исследование структурного состояния лимфоцитарных
мембран при помощи метода флуоресцентных зондов
2.2.12. Определение концентрации у-интерферона в супернатантах Т-лимфоцитов крови человека с помощью метода иммуноферментного анализа
2.2.13. Исследование антителообразующей способности В-лимфоцитов крови человека методом иммуноферментного анализа
2.2.14. Статистическая обработка результатов
Глава 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ УФ-СВЕТА НА СТРУКТУРНОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КОМПОНЕНТОВ Т- И В-КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА ЧЕЛОВЕКА
3.1. Исследование структурного состояния мембран УФ-облученных лимфоцитов крови человека с помощью флуоресцентного зонда 1,8-АНС
3.2. Исследование влияния УФ-света на Т-клеточное звено иммунитета человека
3.2.1. Исследование влияния УФ-света на уровень экспрессии молекул рецепторного комплекса Т-лимфоцитов крови человека
3.2.1.1. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD3 комплексов Т-лимфоцитами крови человека
3.2.1.2. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD4 маркеров Т-лимфоцитами крови человека
3.2.1.3. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD8 маркеров Т-лимфоцитами крови человека ’
3.2.1.4. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD95 маркеров Т-лимфоцитами крови человека
3.2.1.5. Исследование влияния УФ-света на уровень экспрессии CD3 комплексов, CD4 и CD8 маркеров методом проточной цитофлуориметрии
3.2.2. Изучение влияния УФ-света на локализацию молекул рецепторного комплекса (CD3 комплексов, CD4 и CD8 маркеров) на поверхности Т-лимфоцитов крови человека
3.2.3. Влияние УФ-излучения на синтез у-интерферона Т-лимфоцитами крови человека
3.3. Исследование влияния УФ-света на В-клеточное звено иммунитета человека
3.3.1. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD 19 и CD20 маркеров В-лимфоцитами крови человека
3.3.2. Влияние УФ-излучения на синтез IgM, IgG и IgA В-лимфоцитами крови человека
Глава 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО а2Ь-ИНТЕРФЕРОНА НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КОМПОНЕНТОВ Т- И В-КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТ А ЧЕЛОВЕКА
4.1. Влияние рекомбинантного а2ь-интерферона на структурное состояние

AFas - отделяет от молекулы Fas Daxx;
CRD - цистеипобогащенные домены;
PLAD - предлигандный соединительный домен;
LBD - лигандсвязывающий домен;
ТМ - трансмембранный домен;
FADD - Fas-ассоциированный «домен смерти»;
DD - суперсемейство «домен смерти»;
RIP - белок взаимодействия с рецептором;
FLIP - ингибиторный белок;
FAP-1 - Fas-ассоциированная фосфатаза-1;
Daxx-транскрипционный негомологичный адаптерному Fas репрессор
Существует три растворимые формы CD95 антигена, образующиеся в процессе альтернативного сплайсинга и утрачивающие интрацеллюлярные и трансмембранные области. Этот растворимый белок конкурирует с мембранно-локализованным рецептором CD95 в связывании лиганда и может ингибировать CD95 (Fas/APO-1 )-апосредованный апоптоз (А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин, 2002; И.В. Евсигнеева и др., 2005; Т.О. Волкова, Н.Н. Немова, 2006).
1.4. Краткая характеристика УФ-излучения и его влияние на структурнофункциональное состояние компонентов иммунной системы
УФ-излучение относится к группе излучений электромагнитной природы. В спектре электромагнитных колебаний УФ-область располагается между рентгеновскими лучами и видимым светом, занимая диапазон длин волн « 2-400 нм с энергией кванта 125-3 эВ (В.Г. Артюхов, 2009).
Поверхности Земли УФ-свет достигает в диапазоне 287-400 нм с энергией квантов 3—4 эВ. Коротковолновая часть спектра УФ-излучения Солнца полностью поглощается озоновым слоем атмосферы. В биологических