Молекулярно-цитогенетическая характеристика хромосомных аномалий при анэмбрионии и неразвивающейся беременности

• Автор: Лебедев, Игорь Николаевич
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 184 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Хромосомные аномалии и патология раннего j ^
эмбрионального развития человека
1.2. Тканеспецифичный плацентарный мозаицизм у спонтанных
абортуоов: механизмы формирования и фенотипические ^
эффекты
1.3. Цитогенетические аномалии и нарушение пролиферативной
активности клеток
1.4. Возможности молекулярно-цитогенетических методов анализа ^
кариотипа клеток с низкой пролиферативной активностью
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Структура и объем материала
2.2. Культивирование фибробластов экстраэмбриональных
тканей спонтанных абортусов и приготовление препаратов метафазных хромосом
2.3. Получение суспензий некультивированных клеток
экстраэмбриональных тканей и приготовление препаратов интерфазных ядер
2.3.1. Приготовление суспензий некультивированных клеток
цитотрофобласта ворсин хориона
2.3.2. Приготовление суспензий некультивированных клеток
экстраэмбриональной мезодермы
2.4. Получение центромероспецифических ДНК-зондов
2.4.1. Выделение плазмидной ДНК
2.4.2. Мечение плазмидной ДНК методом ник-трансляции
2.5. Флюоресцентная гибридизация in situ на интерфазных ядрах
2.6. Методы статистического анализа

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Структура хромосомных нарушений при анэмбрионии
и неразвивающейся беременности в условиях нормальной пролиферации клеток в долгосрочных культурах
3.2. Молекулярно-цитогенетическое исследование кариотипа клеток спонтанных абортусов с низкой пролиферативной активностью in vitro
3.2.1. Создание алгоритма молекулярно-цитогенетического анализа кариотипа некультивированных клеток
с низкой пролиферативной активностью in vitro
3.2.2. Интерфазный FISH-анализ кариотипа клеток спонтанных абортусов с низкой пролиферативной активностью in vitro
3.3. Молекулярно-цитогенетическая характеристика хромосомного мозаицизма как фактора ранней эмбриональной летальности
3.3.1. Определение спонтанной частоты анеуплоидии и полиплоидии в клетках цитотрофобласта хориона и экстраэмбриональной мезодермы у медицинских абортусов методом флюоресцентной гибридизации in situ
3.3.2. Молекулярно-цитогенетический анализ хромосомного мозаицизма в экстраэмбриональных тканях
спонтанных абортусов
3.4. Ретроспективный молекулярно-цитогенетический анализ тетраплоидии в экстраэмбриональных тканях
спонтанных абортусов.,
3.5. Сравнительная характеристика структуры хромосомных нарушений при нормальной и низкой пролиферативной активности клеток спонтанных абортусов in vitro
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЭ - анэмбриония;
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;
НБ - неразвиваюгцаяся беременность;
СА - спонтанный абортус;
ЭДТА - этлендиаминтетрауксусная кислота;
СРМ - ограниченный плацентарный мозаицизм
(англ. - Confined Placental Mosaicism);
bio-11-dUTP - биотинилированный дезоксиуридинтрифосфат;
CGH - сравнительная геномная гибридизация
(англ. - Comparative Genomic Hybridization);
DAPI - 4-6-диамино-2-фенилиндол;
dATP - дезоксиаденозинтрифосфат;
dCTP - дезоксицитидинтрифосфат;
dGTP - дезоксигуанозинтрифосфат;
dig-11-dUTP - дигоксигенированный дезоксиуридинтрифосфат;
FITC - флюоресцеинизотиоцианат;
FISH - флюоресцентная in situ гибридизация
(англ. - Fluorescence In Situ Hybridization);
PBS - фосфатный буфер (англ. - Phosphate Buffer Solution);
PCC - преждевременная хромосомная конденсация
(англ. - Premature Chromosome Condensation);
PCNA - ядерный антиген клеточной пролиферации
(англ. - Proliferating Cell Nuclear Antigen);
PPI - потенциальный пролиферативный индекс
(англ. - Potential Proliferative Index);
SSC - стандарнтый раствор цитрата натрия
(англ. - Standard Sodium Citrate);
TRITC - тетраметилродаминизотиоцианат;
WS - буфер с раствором детергента (англ. - Wash Solution)

Кроме того, представляется очевидным, что возникновение генерализованной трисомии (VI тип) может являться следствием либо мейотических мутаций, либо митотического нерасхождения в зиготе. Таким образом, характер распределения клеток с аутосомной трисомией в плацентарных тканях может в некоторой степени определяться типом клеточного деления (мейо-тическое или митотическое), в котором происходит нерасхождение хромосом.
Вышеуказанный подход к рассмотрению механизмов формирования тканеспецифичного распределения аутосомных трисомий позволяет выделить следующие закономерности:
1. Наличие аутосомной трисомии только в цитотрофобласте и ее отсутствие в экстраэмбриональной мезодерме указывает на мейотическое происхождение мутации (подтипы 1.1, 1.2.1, 4.1; единственное исключение -1.2.2).
2. Наличие аутосомной трисомии только в экстраэмбриональной мезодерме (при ее отсутствии в цитотрофобласте) свидетельствует о постзи-готической митотической ошибке (типы II, V).
3. Присутствие аутосомной трисомии как в цитотрофобласте, так и в экстраэмбриональной мезодерме может являться следствием как мейоти-ческой, так и митотической ошибок (типы III, VI).
Важно отметить, что указанные закономерности справедливы как в случае наличия аутосомной трисомии в собственно эмбриональных тканях, так и при нормальном кариотипе эмбриона. Это обстоятельство позволяет оценить теоретически ожидаемый относительный вклад мейотических и митотических мутаций в этиологию трисомий, даже в тех случаях, когда отсутствует информация о хромосомном наборе клеток эмбриональных тканей, что особенно ценно при анализе происхождения трисомий у спонтанных абортусов.