Разработка тест-системы на основе желточных иммуноглобулинов иммунизированных перепелов для индикации HBsAg

• Автор: Сокурова, Алла Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.06, 14.00.46
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 130 с. : ил.

Оглавление

Перечень сокращений и условных обозначений
Введение
1 Обзор литературы
1.1 Краткие сведения о вирусном гепатите В
1.1.1 Вирус гепатита В, его морфология, биологические и антигенные свойства
1.1.2 Открытие первого маркера вируса гепатита В
1.1.3 Строение поверхностного антигена вируса гепатита В
1.1.4 Цикл репродукции вируса гепатита В
1.2 Диагностика вирусного гепатита В
1.2.1 Серологические маркеры инфекции
1.2.2 Методы иммунологической диагностики поверхностного антигена вируса гепатита В
1.3 Обоснование выбора птиц в качестве донора биологического сырья
1.4 Диагностическая и практическая ценность иммуноглобулинов желтков яиц в различных областях биологической науки
1.4.1 Гуморальный иммунитет птиц
1.4.2 Область применения желточных иммуноглобулинов
2 Материалы и методы
2.1 Материалы
2.2 Методы исследования
2.2.1 Определение соответствия перепелов статусу животных, свободных от специфических патогенов вирусной и микробной этиологии
2.2.2 Способ подготовки к стерилизации и стерилизация комбикорма
2.2.3 Способ забора крови у перепелов
2.2.4 Особенности приготовления препаратов для иммунизации
птиц
2.2.5 Способ иммунизации перепелов

2.2.6 Процесс выделения иммуноглобулинов из желточной массы
яиц и их очистка
2.2.7 Определение титра специфических иммуноглобулинов к поверхностному антигену вируса гепатита В
2.2.8 Статистические методы исследования
3 Подготовка биологической модели (перепелов) для проведения экспериментальных исследований
3.1 Особенности содержания перепелов в условиях эксперимента
3.2 Схема иммунизации перепелов
3.3 Результаты определения соответствия перепелов статусу животных, свободных от специфических патогенов
3.4 Влияние факторов окружающей среды и условий эксперимента
на физиологические показатели перепелов
3.5 Влияние схемы иммунизации на морфометрические показатели перепелиных яиц
3.6 Динамика изменений титров специфических иммуноглобулинов к НВэА§ в сыворотке крови и желтках яиц перепелов при использовании различных препаратов для иммунизации
4 Формирование опытного образца тест-системы для индикации HBsAg на основе желточных иммуноглобулинов и оценка его эффективности
4.1 Определение чистоты желточных иммуноглобулинов
4.2 Оценка эффективности разработанной тест-системы для индикации НВэА§ на основе желточных иммуноглобулинов
4.3 Схема получения лабораторного образца диагностической тест-системы для индикации HBsAg на основе желточных иммуноглобулинов
Обсуждение полученных результатов
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
Приложения

Перечень сокращений и условных обозначений
анти-НВс — антитела к сердцевинному антигену вирусного гепатита В
анти-НВе - антитела к антигену «инфекционности» вирусного гепатита В
анти-HBs - антитела к поверхностному антигену вирусного гепатита В
БСА - бычий сывороточный альбумин
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека
ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения
ГОСТ - государственный стандарт
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИФА - иммуно ферментный анализ
К' - отрицательный контроль
к+ - положительный контроль
к* - сомнительный контроль
кГр - килогрей
кДа - килодальтон
ккз - комбикормовый завод
ККРА - кровяно-капельная реакция агглютинации
ОП - оптическая плотность
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РИД - реакция иммунной диффузии
РИМ - радиоиммунный метод
РИГА - реакция непрямой гемагглютинации
РНК - рибонуклеиновая кислота
РОПГА - реакция обратной пассивной гемагглютинации
РТГА - реакция торможения гемагглютинации
СКРА - сывороточно-капельная реакция агглютинации
СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита
ТУ - технические условия
ФБР - фосфатно-буферный раствор
GMP - надлежащая производственная практика (good manufacturing practice)

плаценты-пропускать дифтерийный-антитоксин к плоду. «Так как исследование в этом направлении яиц млекопитающих с технической стороны представляет слишком большие затруднения, — писал учёный, — то я обратился за решением этого вопроса к птичьим яйцам (яйцам кур), для которых первые стадии эмбриологического развития до известной степени аналогичны с эмбриологическим развитием плода млекопитающих» [18].
C.К. Дзержговский исследовал яйца кур на содержание в них «дифтерийного антитоксина» и выяснил, что «антитоксическими свойствами» обладает только желток, белок не содержал «антитоксина» вовсе [18].
Также им было установлено, что в процессе инкубации «антитоксин» из желтка может переходить в эмбрион.
Хотя эти данные сам С.К. Дзержговский считал малодоказательными, D.T. Fraser et al. и R. Patterson et al. подтвердили правильность его предположений [195, 196].
Ключевым моментом исследований «дифтерийного антитоксина» было заключение С.К. Дзержговского о природе желточных антител: «В" желтке тела, обладающие антитоксическими свойствами, будут принадлежать к глобулинам и в общем обладать теми же свойствами, как и в сыворотке» [18].
D.T. Fraser et al., опираясь на исследование С.К. Дзержговского, в своих исследованиях по изучению наследственной передачи невосприимчивости к дифтерии на утках также выделял иммуноглобулины из желтков яиц [195].
В эксперименте было показано, что колебание антител в? содержимом желтка сопровождалось и соизмерялось с изменениями в содержании «антитоксина» (антител) в крови материнских особей [153].
Для исследования процесса перехода антивирусных антител из крови в яичный желток использовали кур, которым однократно внутривенно вводили бычий сывороточный альбумин (БСА) в концентрации 50 мг на 1 кг массы тела [99,196].
Этот опыт является основополагающим, так как радиографическая метка (у-глобулин, меченный I131), входящая в иммуноглобулины желтка яиц,