Разработка иммуноферментных тест-систем для диагностики микоплазмозов птиц

• Автор: Волкова, Ирина Александровна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 138 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Общие сведения о респираторном микоплазмозе

и инфекционном синовите.

2.2. Общая характеристика возбудителей

респираторного микоплазмоза и инфекционного синовита

2.2.1.Таксономическое положение Мги Мс

2.2.2.Морфология колоний и

структурнохимический состав

2.2.3.Резистентность к физикохимическим воздействиям.

2.2.4.Антигенная активность Мг и Мс.
2.2.5.Геммаглютинирущая активность Мг и Мс
2.2.6.Патогенность Мг и Мс
2.3. Патогенез и патоморфологические изменения
2.4. Эпизоотологические данные
2.5. Иммунитет, лечение и профилактика
2.6. Диагностика респираторного микоплазмоза
и инфекционного синовита
2.6.1.Обнаружение антигенов Мг и Мс.
2.6.2,Обнаружение антител к Мг и Мс.
2.7. Иммуноферментный анализ
2.7.1.Сущность иммуноферментного анализа
2.7.2.ИФА для обнаружения антигенов.
2.7.3.ИФА для обнаружения антител.
2.7.4.Применение ИФА для выявления микоплазменных антител
2.8. Заключение по обзору литературы
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3.1. Материалы и методы.
3.1.1.Материал ы
3.1.2.Метод ы.
3.2. Результаты собственных исследований
3.2.1.Получение очищенных и концентрированных препаратов антигенов Мг и Мс
3.2.2.Разработка тестсистем для выявления и определения активности антигенов Мг в культуральном сырье.
3.2.2.1.Разработка тестсистемы на основе непрямого сэндвичварианта иммуноферментного анализа.
3.2.2.2. Сравнительная оценка сэндвичварианта ИФА
3.2.2.3. Разработка тестсистемы на основе непрямого блокирующего варианта иммуноферментного анализа
3.2.2.4. Сравнительная оценка блокирующего варианта ИФА
и реакции геммагглютинации.
3.2.3. Разработка тестсистем для определения антител к ii и vi на основе непрямого варианта иммуноферментного анализа
3.2.4. Применение наборов на основе разработанных тестсистем для определения антител к Мг и Мс
3.2.4.1.Выявление антител кМги Мс в ИФА при контроле вакцинных препаратов.
3.2.4.2.Изучение гуморального иммунитета к Мг и Мс
с применением базовых реакций РА, РТГА и разработанных тестсистем
3.2.5. Изучение эпизоотической ситуации по респираторному микоплазмозу и инфекционному синовиту на птицефабриках Российской Федерации в годах поданным серологического мониторинга с применением наборов ИФА
4.0БСУЖДЕНИЕ.
5.ВЫВОД Ы.
6.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
7.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Для выявления и количественной оценки антигена ii в антигенсодержащем сырье, предназначенном для производства вакцинных препаратов и диагностикумов, впервые в России разработаны иммуноферментные тестсистемы на основе сэндвичварианта иммуноферментного анализа и непрямого жидкофазного блокирующего варианта иммуноферментного анализа с использованием в качестве блокирующих антител аффинноочищенных I сывороток крови животных. С помощью зарегистрированных на территории РФ иммуноферментных диагностических наборов фирмы США и разработанных нами тестсистем проведены исследования по ii и vi за гг. Российской Федерации. Научная новизна полученных нами результатов подтверждена получением патента на изобретение. Практическая значимость. ii в сыворотках крови кур иммуноферментным методом ТУ 5, Набор для определения антител к ii иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении ТУ 6, Набор для определения антител к vi иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении ТУ 7. Разработаны и утверждены директором ВНИИЗЖ Методика очистки и концентрирования антигена ii, Методика определения титра антител к ii в сыворотках крови кур методом одного разведения в непрямой реакции иммуноферментного анализа, Методика очистки и концентрирования антигена vi, Методика определения титра антител к vi в сыворотках крови кур методом одного разведения в непрямой реакции иммуноферментного анализа, Методика выявления и определения активности антигена ii в непрямом сэндвичварианте иммуноферментного анализа, Методика выявления и определения активности антигена ii в непрямом жидкофазном блокирующем варианте иммуноферментного анализа. Разработанные иммуноферментные тестсистемы применяются в научноисследовательской и ветеринарной практике при оценке качества сырья для изготовления диагностических наборов и вакцин, при ретроспективной диагностике ii и vi и контроле поствакцинального иммунитета. При использовании диагностических наборов для определения антител к ii и vi на основе разработанных иммуноферментных тестсистем в течение г. России и ближнего зарубежья, а также реализовано более 0 коммерческих наборов, выпускаемых в ФГУ ВНИИЗЖ. Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ВНИИЗЖ в г. ФГУ ВНИИЗЖ Достижения молодых ученых в ветеринарную практику г. Владимир, г. Всероссийской научной конференции во ВГНКИ Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов г. БГВА Современные проблемы генетики г. Витебск, г. Международной конференции молодых ученых г. Щелково, г. Международной научнопрактической конференции, посвященной летию ЕКВМ г. Харьков, г. Международной научной конференции посвященной летию ФГУ ВНИИЗЖ г. Владимир, г. Международной научнопрактической конференции, посвященной летию института г. Покров, г. Конференции по птицеводству г. Зеленоград, г. Мониторинг и генодиагностика инфекционных болезней животных г. Владимир, г. Публикации. По материалам диссертации опубликовано научных работ. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 9 страницах, иллюстрирована таблицами и рисунками. Исследования по диссертационной работе выполнены в течение г. ФГУ Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ ВНИИЗЖ, г. Владимир. Автор выражает искреннюю благодарность д. .. В.Л. Узюмову, д. А.П. Пономареву, к. Н.С. Мудрак, к. В.Н. Ирзе, к. .. Луговской, к. М.А. Волковой, к. М.В. Гирину, к. М.С. Волкову, Ю. В. Зинковскому, к. Т.В. Оковытой, к. А.И. Куприянову за практическую помощь в выполнении отдельных этапов работы.