Сериновые протеиназы гранулоцитов человека; ингибирование кислотостабильными производными интер-альфа-ингибитора трипсина

• Автор: Платонова, Любовь Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 162 c. : ил

СОКРАЩЕНИЯ И ОБОЗНАЧЕНИЯ, ПРИНЯТЫЕ В ТЕКСТЕ ДИССЕРТАЦИИ
ГЛАВА I. СЕРИНОВЫЕ ПРОТЕИНАЗЫ ГРАНУЛОВДТОВ ЧЕЛОВЕКА И
МЛЕКОПИТАЮЩИХ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1. Выделение и очистка сериновых протеиназ грану-лоцитов человека и млекопитающих
2. Свойства, аминокислотный и углеводный составы
и элементы первичной структуры сериновых протеиназ гранулоцитов
3. Субстратная специфичность сериновых протеиназ гранулоцитов
4. Ингибирование сериновых протеиназ гранулоцитов природными ингибиторами
5. Экзогенные ингибиторы протеиназ гранулоцитов как терапевтические средства
6. Физиологическая и патогенетическая роль сериновых протеиназ гранулоцитов
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Материалы
2. Методы исследования
2.1. Выделение гранулоцитов из крови человека, субклеточных фракций и протеиназ гранулоцитов
2.1.1. Выделение гранулоцитов из крови человека
2.1.2. Выделение субклеточных фракций гранулоцитов человека

2.1.3. Хроматография протеиназ гранулоцитов на КСИ-

сефарозе 4В
2.1.4. Хроматография на БР-сефадексе С-50 элгоата протеиназ гранулоцитов с КСИ-сефарозы 4В
2.1.5. Фракционирование протеиназ гранулоцитов человека с помощью препаративного ИЭФ лизата гранулоцитов человека
2.1.6. Оценка относительных молекулярных масс протеиназ гранулоцитов
2.2. Получение и определение активности частично очищенных препаратов низкомолекулярного кинино-гена человека
2.3. Оценка содержания плазминогена в частично очищенных препаратах низкомолекулярного кининогена человека
2.4. Методы измерения активностей протеиназ гранулоцитов человека (кининогеназной, кининазной, фибринолитической, эстеразной, амидазной)
2.5. Определение активности урокиназы человека
2.6. Определение антитриптической активности КСИ-сефарозы 4В
2.7. Исследование влияния белковых и синтетических ингибиторов на протеиназы гранулоцитов
2.8. Кинетические методы исследования
2.8.1. Определение кинетических параметров кщ и ¥ взаимодействия протеиназ гранулоцитов с синтетическими субстратами
2.8.2. Определение Кс и ккат гидролиза брадикинина кининазой гранулоцитов

2.8.3. Определение константы скорости ингибирования (к1) протеиназ гранулоцитов под действием КСИ
из сыворотки крови кролика
2.8.4. Определение кинетических параметров к^ и торможения МеОЗисА1аА1аЕго¥а1М-амидазной активности эластазы гранулоцитов необратимым ингибитором МеОБисА1аА1аЕгоУа1СН2С1
2.8.5. Определение величин к^ и ингибирования 2б1у31уАгеМ-амидазной активности активатора плазминогена гранулоцитов под действием 2Щу-61уАгеСН2С1
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
I. Фракционирование сериновых протеиназ гранулоцитов человека
1. Субклеточная локализация сериновых протеиназ гранулоцитов
2. Фракционирование протеиназ гранульной фракции гранулоцитов с помощью аффинной хроматографии на КСИ-сефарозе 4В
3. Фракционирование протеиназ лизата гранулоцитов человека методом препаративного ИЭФ
П. Субстратная специфичность сериновых протеиназ гранулоцитов человека, очищенных методом ИЭФ
1. Идентификация и распределение активностей сериновых протеиназ гранулоцитов человека во фракциях, полученных после ИЭФ лизата клеток
2. Кинетический подход к изучению субстратной специфичности протеиназ гранулоцитов человека

нулоцитами, из которых в окружающую среду освобождаются проте-иназы в высоких концентрациях, представляющие потенциальную опасность, связанную с деструкцией компонентов соединительной ткани, системы свертывания, фибринолиза, комплемента, с генерированием медиаторов воспаления и т.д. /36/.
Способность сериновых протеиназ гранулоцитов гидролизовать in vitro такие субстраты как эластин /49,184/, коллаген /184,186/, протеогликан /108,184/, фибриноген /165/, плазминоген Д43/, кини-ноген /127,139,140/, ангиотензиноген /196/ и др. определяет биологическую роль этих ферментов в организме.
Для некоторых сериновых протеиназ гранулоцитов в условиях in vivo на экспериментальных животных продемонстрировано свойство оказывать эффекты, сходные с наблюдаемыми в организме человека при некоторых заболеваниях. Так, прямое внутриартериальное введение эластазы гранулоцитов человека собаке вызывает деградацию артериального эластина, которая сопровождает острые артерииты /99/. При внутритрахеальном введении экстракта гранулоцитов или препаратов очищенной эластазы гранулоцитов экспериментальным животным в их легких наблюдаются деструктивные изменения подобные перестройке легочной ткани при эмфиземе легких у человека /103, 104,190/. Эти наблюдения согласуются с работами многих исследователей, показавших, что сериновые протеиназы гранулоцитов в условиях in vitro могут гидролизовать почти все компоненты соединительной ткани легких /49,108,184/. Экспериментальная эндотоксемия животных /38,71/, сопровождающаяся освобождением лизосомных протеиназ гранулоцитов, а также прямое введение эластазы и кате-псина G зеленым обезьянам /70/ приводят к снижению содержания в крови животных П,У,УШ,1Х,Х и ХШ факторов системы свертывания и фибриногена и развитию коагулопатий /38,74/. Этот факт доказывает участие протеиназ гранулоцитов в деградации компонентов систе-