Липоксигеназное окисление полиненасыщенных жирных кислот

• Автор: Судьина, Галина Федоровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 219 с. : ил.

Содержание
Список сокращений
I. ВВЕДЕНИЕ
II. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
11.1. Лейкотриены и ферменты их синтеза
11.1 .А. Физиологическое действие лейкотриенов
11.1.Б. Химические реакции образования лейкотриенов и ферменты, участвующие в этом процессе
11.2. Механизмы липоксигеназного катализа
11.2.A. Реакции, катализируемые липоксигеназами. Субстраты и продукты липоксигеназ
11.2.Б. Инактивация и ингибирование липоксигеназ
11.2.В. Кинетика и механизм катализа
11.3. 5-Липоксигеназа - ключевой фермент в синтезе лейкотриенов
различных факторов в регуляции активности 5-липоксигеназы
11.3.A. 5-Липоксигеназа
11.3.Б. Регуляция активности 5-липоксигеназы
11.4. Адгезионные взаимодействия и регуляция метаболических клеточных
ответов
11.4.A. Молекулы, участвующие в адгезионных взаимодействиях. 55 М.4.Б. Влияние адгезионных взаимодействий на синтез лейкотриенов
и респираторный взрыв в нейтрофилах

II.4.В. Влияние АТФ и продуктов его гидролиза на адгезию и синтез
лейкотриенов в нейтрофилах. Экто-АТФаза
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
II 1.1. Материалы
III.2. Методы исследования
III.2.1. Методы выделения нейтрофилов и культивирования эндотелиальных клеток
111.2.2. Получение липоксигеназ и исследование их кинетических свойств
111.2.3. Адгезия и синтез лейкотриенов
111.2.4. Методы регистрации образования активных форм кислорода
111.2.5. Исследование механизма ингибирования липоксигеназ производными кофейной кислоты
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
IV. 1. Синтез 5-липоксигеназных метаболитов в интактных клетках в
суспензии нейтрофилов
IV. 1.1. Регуляция биосинтеза 5-липоксигеназных метаболитов доступностью эндогенного и экзогенного субстрата - арахидоновой кислоты
IV. 1.2. Кинетика действия 5-липоксигеназы в интактных клетках

IV. 1.3. Зависимость скорости синтеза лейкотриенов от концентрации
ионофора А23187
IV.2. pH-Зависимость ферментативной активности в реакциях окисления полиненасыщенных жирных кислот индивидуальной 5-липоксигеназой,
выделенной из ячменя
IV.3. Биосинтез 5-липоксигеназных продуктов в нейтрофилах
межклеточных контактов и внутриклеточного pH
IV.3.1. Эффекты клеточной плотности на синтез 5-липоксигеназных
продуктов в нейтрофилах
IV.4. Адгезия нейтрофилов и синтез лейкотриенов
IV.4.1. Адгезия нейтрофилов к различным биологическим поверхностям. Основанный на секреции и гидролизе АТФ механизм,
регулирующий адгезию
IV.4.2. Регуляция синтеза лейкотриенов в нейтрофилах человека при
адгезии к различным биологическим поверхностям
IV.4.3. Роль межклеточных адгезионных взаимодействий в активации респираторного взрыва в нейтрофилах
IV.5. Синтез новых ингибиторов липоксигеназ и характеристика их действия
V. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Список литературы

данной кислоты). Кинетическая схема базируется на постулатах: 1) об автоактивации фермента продуктом реакции; 2) о существовании по меньшей мере двух состояний липоксигеназы, различающихся степенью окисления иона железа - Ие2* форма (Е) и активированная Ее3+ форма (Е*). Активация гидропероксикислотами включает окисление Е до Е*. 3) о конкурентном ингибировании диоксигеназной реакции субстратом и продуктом; 4) о стерео специфичности ферментативного окисления жирной кислоты в отличие от свободно-радикального диоксигенирования полиеновых кислот. В общем виде предложенная кинетическая схема действия 15-липоксигеназы имеет вид, представленный на схеме 4. Реакционная последовательность Е -» ЕР -> Е* отражает активацию фермента; ингибиторный эффект больших концентраций субстрата отражен в образовании непродуктивного комплекса Ев, конкурирующего с ЕР, Е8->Е->ЕР; каталитический цикл диоксигеназной реакции начинается со связывания субстрата активированной формой фермента Е* в комплекс Е*Э:
Е* -> Е*Э -> ЕЭ -> Е302 -» Е*Р Е*

и заканчивается высвобождением продукта Р из комплекса Е*Р. На данной стадии необходимо присутствие кислорода. Предложенный Шеве механизм катализа 15-липоксигеназой развивается далее в работах Шилстра и Велдинк [ЭсЫга е1 а1., 1993]. Авторы детально исследовали начальный участок кинетических кривых и привели схему, объясняющую наличие лаг-