Каталитические и регуляторные субъединицы Х + , К +-АТФаз : Исследование органо- и тканеспецифичной экспрессии

• Автор: Романова, Людмила Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 118 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
1 ВВЕДЕНИЕ
2 КАТАЛИТИЧЕСКИЕ И РЕГУЛЯТОРНЫЕ СУБЪЕДИНИЦЫ Х+,К+-АТФАЗ
(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
2.1 Введение
2.2 1Ма+,К+-АТФаза
2.3 |3-субъедишщы Ца+,К+-АТРазы
2.4 Н+,К+-АТФаза желудка
2.5 Н+,К+-АТФазы нежелудочного типа
2.6 р-субъединица нежелудочных Н+.К+-АТФаз
2.7 у-субъединица Ыа+,К+-АТФазы
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Введение
3.2 Исследование экспрессии генов каталитических субъединиц нежелудочных Н+,К+-АТФаз в тканях млекопитающих методом обратной транскрипции-ПЦР
3.3 Исследование экспрессии генов регуляторных субъединиц Х+,К -АТФаз в тканях млекопитающих методом обратной транскрипции-ПЦР
3.4 Определение соотношения количества транскриптов каталитических и регуляторных субъединиц Х+,К+-АТФаз в органах крысы методом количественной ПЦР
3.5 Локализация мРНК каталитической субъединицы нежелудочной Н+,К+-АТФазы в органах крысы методом гибридизации in situ
3.6 Исследование экспрессии генов каталитических и регуляторных субъединиц Х+,К+-ДТФаз с использованием базы данных SAGEmap
4 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
4.1 Материалы
4.2 Методы
5 ВЫВОДЫ
6 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
7 Приложение
8 Список литературы

1 ВВЕДЕНИЕ
Х+,К+-АТФазы входят в группу ионтранспортирующих АТФаз P-типа. Белки этого семейства катализируют АТФ-зависимый транспорт ионов калия внутрь клетки в обмен на протоны или ионы натрия. По функциональным и структурным свойствам Х+,К+-АТФазы разделяются на три группы: различные изоформы Na+,K -АТФазы, выполняющей такие необходимые клеточные функции, как поддержание ионного гомеостаза клетки и формирование мембранного потенциала; Н+,К+-АТФаза слизистой оболочки желудка, закисляющая желудочный сок; Н+,К+-АТФазы нежелудочного типа, физиологическая роль которых остается до настоящего времени невыясненной.
Как наименее охарактеризованнные представители этого семейства АТФаз, Н+,К+-АТФазы нежелудочного типа представляют особый интерес для исследований. В рамках данной работы была поставлена задача исследовать экспрессию генов каталитических субъединиц Н+,К+-АТФаз нежелудочного типа на уровне мРНК в различных тканях млекопитающих, а также прояснить вопрос о том, какая из известных Р-субъединиц или еще неизвестная субъединица может служить истинным партнером каталитической субъединицы при формировании ферментативного комплекса в клетке. Работа является частью структурно-функциональных исследований белков активного транспорта, проводимых в группе мембранных биоэнергетических систем ИБХ РАН им. М.М.Шемякпна и Ю.А.Овчинникова.
Автор выражает признательность своему научному руководителю, кандидату химических наук М.Б. Костиной и зав. группой мембранных биоэнергетических систем, доктору химических наук М.И. Шахпаронову за внимание к данной работе и помощь в ее оформлении, кандидату биологических наук С.В. Новоселову за помощь в проведении экспериментов по in sim гибридизации, кандидату химических наук Н.С.

Быстрову за синтез олигонуклеотидных зондов. Особую признательность и огромную благодарность автор выражает М.В. Егорову за постоянную помощь в работе, внимание, ценные советы и плодотворные дискуссии.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ