Нивелирование влияния биологической матрицы при определении лекарственных препаратов в плазме крови методом хромато-масс-спектрометрии

• Автор: Ярошенко, Дмитрий Вадимович
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 153 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ

1.1. Требования к физико-химическим методам анализа при определении лекарственных препаратов в биологических жидкостях для клинических исследований
1.2. Масс-спектрометрические методы, применяемые при определении лекарственных препаратов в плазме крови

1.2.1. Методы ионизации в ВЭЖХ-МС

1.2.1.1. Химическая ионизация при атмосферном давлении

1.2.1.2. Электроспрей ионизация

1.2.2. Виды масс-анализаторов, используемых в ВЭЖХ-МС

1.2.2.1. Квадруполъный масс-анализатор

1.2.2.2. Ионная ловушка

1.2.2.3. Времяпролетный масс-анализатор
1.2.3. Тандемная масс-спектрометрия (МС)П
1.3. Матричный эффект в масс-спектрометрии и способы его устранения
1.3.1. Оценка матричного эффекта
1.3.2. Способы снижения и устранения матричного эффекта
13.2.1. Выбор способа пробоподготовки биообъектов к анализу
1.3.2.2. Выбор масс-спектрометрических условий
13.3.3. Использование внутреннего стандарта для устранения матричного эффекта
1.4. Пробоподготовка плазмы крови к ВЭЖХ-МС анализу при определении лекарственных препаратов

1.4.1. Осаждение белков
1.4.2. Жидкостно-жидкостная экстракция
1.4.3. Сорбционное концентрирование (твердофазная экстракция)
1.4.3.1. Общие сведения о сорбционном концентрировании
1.4.3.2. Использование сверхсшитого полистирола при сорбционном концентрировании
1.4.4. Последние достижения в области пробоподготовки плазмы крови к анализу при определении лекарственных препаратов
I.5. Валидация методик определения лекарственных препаратов в плазме крови
1.5.1. Понятие валидации
1.5.2. Валидационные критерии, предъявляемые к методикам определения лекарственных препаратов в плазме крови
1.5.2.1. Селективность определения
1.5.2.2. Нижний предел количественного определения
1.5.2.3. Линейный диапазон
1.5.2.4. Правильность
1.5.2.5. Повторяемость
1.5.2.6. Матричный эффект
1.5.2.7. Стабильность аналитов
ГЛАВА II. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
П.1. Аппаратура
II.2. Реагенты
П.З. Приготовление стандартных растворов аналитов
П.4. Приготовление вспомогательных растворов

П.5. Характеристика анализируемого объекта .. П.6. Пробоподготовка плазмы крови к анализу

11.6.1. Пробоподготовка плазмы крови при определении цисплатина
11.6.2. Пробоподготовка плазмы крови при определении силденафила
11.6.3. Пробоподготовка плазмы крови при определении циклосерина
11.6.4. Пробоподготовка плазмы крови при определении ропинирола
11.6.5. Пробоподготовка плазмы крови при определении капецитабина и 5-фторурацила
ІІ.7. Условия хроматографического и масс-спектрометрического определения аналитов
11.7.1. ВЭЖХ-МС условия определения цисплатина
11.7.2. ВЭЖХ-МС/МС условия определения силденафила
11.7.3. ВЭЖХ-МС/МС условия определения циклосерина
11.7.4. ВЭЖХ-МС/МС условия определения ропинирола
11.7.5. ВЭЖХ-МС/МС условия определения капецитабина и 5-фторурацила
П.8. Валидационные характеристики методов
II.9. Клинические исследования, выполненные с применением разработанных методик
ГЛАВА III. ВЫЯВЛЕНИЕ И УСТРАНЕНИЕ МАТРИЧНЫХ ЭФФЕКТОВ, ПРИВОДЯЩИХ К НЕУДОВЛЕТВОРИТЕЛЬНОЙ
ІІІ.1. Матричный эффект при определении цисплатина в плазме крови
СХОДИМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

Ш.2. Матричное влияние при определении силденафила в плазме крови

Рис.15. Сравнение электрораспылительной ионизации (А) и химической ионизации при атмосферном давлении (Б) в пост-колоночном режиме [58].
Выбран метод химической ионизации при атмосферном давлении. Но даже при использовании этого варианта ионного источника матричный эффект наблюдался для большинства аналитов и внутренних стандартов на всех протестированных концентрационных уровнях, при этом его значения правильности варьировались от 85,2 до 149,4%. В [51] показано, что в случае капилляров или колонок с очень малым внутренним диаметром (<0,5 мм) методы электрораспылительной ионизации оказываются менее восприимчивы к присутствию в пробе мешающих компонентов биологической матрицы. Матричный эффект в диализате был оценен на различных концентрационных уровнях окскарбазепина и его главного метаболита с использованием микроколоночной, капиллярной и нано-ВЭЖХ-МС/МС систем [51, 60].
Отмечено, что при низкой скорости потока уменьшается размер заряженных капель и снижается объем растворителя, который необходимо испарить для перехода ионов в газовую фазу. Это приводит к уменьшению концентрации примесей [60, 61]. В [62] наблюдалось подавление ионизации, вызванное матричным эффектом, при введении плазмы крови и мочи в условиях традиционной ВЭЖХ.