Молекулярно-генетические аспекты патогенеза отечно-инфильтративной формы рака молочной железы

• Автор: Нечаев, Илья Николаевич
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 119 с. : 7 ил.

Оглавление
Введение
Глава 1. Обзор Литературы
1.1 Классификация и эпидемиология отечной формы рака молочной железы
1.2 История становления ОИФРМЖ самостоятельной нозологией
1.3 Клиническая и патоморфологическая симптоматика ОИФРМЖ
1.4 Молекулярные особенности ОИФРМЖ
1.5 Диагностика ОИФРМЖ
1.6 Лечение ОИФРМЖ
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1 Сбор коллекционного материала
2.2 Методика подготовки образцов биопсийного материала к исследовательским испытаниям
2.3 Протокол проведения обратной транскрипции
2.4 Подбор и разработка праймеров и зондов
2.5 Колличественная ОТ-ПЦР с детекцией продуктов в режиме
реального времени
2.6 Определение референсных генов для биопсий РМЖ и клеточных
линий МСГ7 и БК-ВЛ-З
2.7 Проведение полногеномного транскриптомного анализа
2.8 Культивирование модельных клеточных линий МСГ7 и БК-ВЛ-З и
выделение РНК
2.9 Иммуногистохимическое исследование образцов биопсийного
материала (ЕЛ, РЛ, НЕЛ2)
Глава 3. Определение молекулярно-генетических критериев РМЖ с помощью экспрессионного анализа
3.1 Разработка критериев определения рецепторного статуса эстрогена
(ЕЛ) и прогестерона (РЛ) с помощью экспрессионного анализа
3.2 Разработка критериев определения рецепторного статуса эпидермального фактора роста 2 (ЕЛВВ2) с помощью экспрессионного анализа

Глава 4. Исследование молекулярно-генетических маркеров патогенеза ОИФРМЖ по данным полногеномного транскриптомного анализа
4.1 Подготовка образцов к полногеномному транскриптомному анализу
4.2 Полногеномный транскриптомный анализ
4.3 Верификация данных, полученных полногеномным транскриптомным анализом, методом количественной ОТ-ПЦР в реальном
времени
Глава 5. Поиск и верификация значимых регуляторных пар микроРНК-
мРНК
5.1 Анализ антикорреляционных взаимодействий микроРНК-мРНК участвующих в патогенезе ОИФРМЖ
5.2 Верификация данных по микроРНК-мРНК, полученных полногеномным транскриптомным анализом, методом количественной ОТ-
ЦПР в реальном времени
Обсуждение
Выводы
Практические рекомендации
Список используемых сокращений
Список литературы

Введение
Актуальность темы
Отечно-инфильтративная форма рака молочной железы (ОИФРМЖ, отечно-инфильтративный РМЖ, маститоподобный РМЖ, inflammatory breast cancer, IBC) относится к диффузно-распространенным формам опухолей и встречается примерно у 5% больных РМЖ [Напсе и др., 2005]. Согласно 7-ому изданию TNM классификации Международного Союза по контролю за раком к ОИФРМЖ относятся первично воспалительная форма (T4d) и вторично воспалительная (T4b) [Sinn, Helmchen, Wittekind, 2010]. Клинически ОИФРМЖ обычно проявляется быстро прогрессирующей эритемой, локальным повышением температуры, отёком и образованием «апельсиновой корки» на коже молочной железы без пальпируемого опухолевого узла в подлежащих тканях [Dirix и др., 2006], и, несмотря на высокоразвитую систему лабораторно-инструментальной диагностики, диагноз ОИФРМЖ ставится только по клиническим признакам. ОИФРМЖ характеризуется высокой злокачественностью, ранним и быстрым лимфогенным и гематогенным метастазированием, высокой летальностью. Средняя 5-летняя выживаемость при ОИФРМЖ составляет около 20% [Piras и др., 2011].
Начальные стадии ОИФРМЖ имеют схожую клиническую симптоматику с местно-воспалительными заболеваниями молочной железы (маститом, рожистым воспалением), что повышает количество ошибочных диагнозов. Стоит учесть, что для ОИФРМЖ не характерно наличие какой-либо определенной гистологической картины, ОИФРМЖ может соответствовать практически любая гистологическая форма РМЖ, что вызывает дополнительные затруднения при постановке диагноза, даже с помощью объективных (лабораторно-инструментальных) методов исследования. Визуальную картину изменения ткани железы, полученную с помощью эхографии, рентгеновской маммографии, компьютерной томографии и магнитно-резонансной томографии при ОИФРМЖ можно интерпретировать по-разному [Сарибекян и др., 2011]. При ОИФРМЖ

васкулогенеза, ангиогенез - это процесс ответвления новых капиллярных отростков от уже существующих кровеносных сосудов. Уже не вызывает сомнения тот факт, что опухоль не может развиваться и расти без образования в ней разветвленной сети капилляров, обеспечивающих снабжение клеток кислородом и питательными веществами. Изучение молекулярных механизмов ангиогенеза позволило перейти от микроскопической оценки плотности сосудов в опухолевой ткани к исследованию конкретных молекул, участвующих в регуляции образования и роста новых сосудов. Важнейшим положительным регулятором ангиогенеза бесспорно является фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), называемый также фактором проницаемости сосудов [Ferrara, 2005]. Уникальность этого фактора заключается в том, что, в отличие от всех других факторов роста, он митогенен только по отношению к эндотелиальным клеткам. Доказано, что VEGF играет ключевую роль в неоангиогенезе при РМЖ.
Результаты ряда ретроспективных клинических исследований свидетельствуют о том, что экспрессия VEGF при ОИФРМЖ имеет, по-видимому, существенное значение для прогноза ОИФРМЖ заболевания, а также влияет на чувствительность опухолей к гормональному и лекарственному лечению [Colpaert и др., 2003; Laere Van и др., 2005]. Его высокий уровень свидетельствует о неблагоприятном прогнозе как при раннем, так и при распространенной ОИФРМЖ. Кроме того, в последнее время активно создаются и исследуются новые препараты с антиангиогенными свойствами, и оценка активности VEGF-зависимого ангиогенеза может стать основой для их целенаправленного применения [Harris, 1998].
Методически, в работах, посвященных роли VEGF при РМЖ, равноправно представлены иммуноферментный и иммуногистохимический методы. Попытки использовать показатели содержания VEGF в крови (как в сыворотке, так и в плазме) в качестве адекватной замены тканевой экспрессии этого белка при оценке активности ангиогенеза в РМЖ и прогнозировании исхода заболевания и/или эффективности терапии до настоящего времени не принесли большого успеха [Adams и др., 2000; Salven и др., 1999].