Вклад молекулярно-генетических маркеров супероксиддисмутазы, каталазы и параоксоназы в развитии окислительного стресса у подростков разных этнических групп с эссенциальной артериальной гипертензией

• Автор: Первушина, Оксана Александровна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 110 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

Введение

Глава 1 Обзор литературы

1 Данные о распространенности артериальной гипертензии в подростковом возрасте

2 Факторы риска артериальной гипертензии в подростковом

возрасте

3 Окислительный стресс при формировании артериальной гипертензии.

4 Генетические полиморфизмы антиоксидантной системы

Глава 2 Материалы и методы исследования

2.1 Характеристика исследуемых групп
2.2 Лабораторные методы исследования
2.3 Методы математической статистики
Глава 3 Собственные результаты и их обсуждения
3.1. Исследования процессов ПОЛ и АОЗ у подростков разных этнических групп с эссенциальной артериальной гипертензией
3.2. Генетические маркеры антиоксидантной защиты у подростков разных этнических групп с ЭАГ
3.2.1. Полиморфизм кодона 16 (А1а-*Уа1) гена супероксиддисмутазы 2
3.2.2. Мутация 60 (С—>7) гена супероксиддисмутазы
3.2.3. Полиморфизм кодона 262 (С—>Т) гена каталазы
3.2.4. Полиморфизм кодона 192 (Gln—*Arg) гена параоксоназы
3.3 Сравнительный анализ частотных характеристик полиморфизмов антиоксидантной системы у подростков европеоидов и монголоидов с эссенциальной артериальной гипертензией
3.4. Вклад полиморфизмов антиоксидантной системы в формирование окислительного стресса у подростков с эссенциальной артериальной гипертензией

3.4.1. Полиморфизм кодона 16 {Ala—>Val) гена супероксиддисмутазы 2 и его вклад в формирование процессов ПОЛ/АОЗ у подростков изучаемых этнических групп
3.4.2. Мутация 60 (С—*Т) гена супероксиддисмутазы 2 и ее вклад в формирование процессов ПОЛ/АОЗ у подростков изучаемых этнических групп
3.4.3. Полиморфизм кодона 262 (С—>7) гена каталазы и его вклад в формирование процессов ПОЛ/АОЗ у подростков изучаемых этнических групп
3.4.4. Полиморфизм кодона 192 {Gin—* Arg) гена параоксоназы 1 и его вклад в формирование процессов ПОЛ/АОЗ у подростков изучаемых этнических
групп
Заключение
Выводы
Список литературы

Список используемых сокращений
АГ артериальная гипертензия
АД артериальное давление
АОА антиокислительная активность
АОЗ антиоксидантная защита
АФК активные формы кислорода
ДК диеновые конъюгаты
КОС коэффициент окислительного стресса
МДА малоновый диальдегид
ОС окислительный стресс
ПОЛ перекисное окисление липидов
ПОН параоксоназа
сод супероксиддисмутаза
СРО свободнорадикальное окисление
ССЗ сердечно-сосудистые заболевания
ТБК - АП тиобарбитуровая кислота
Arg аргинин
Ala аланин
CAT ген каталазы
Gin глутамин
GSH, GSSG глутатион восстановленный, окисленный PON 1 ген параоксоназы 1 Val валин

способность крови тормозить накопление ТБК - активных продуктов в суспензии. ПОЛ индуцировали добавлением БеБОд х 7Н2О, причем контрольная проба не содержала плазмы крови. АОА определяли на спектрофотометре СФ-56 и выражали в усл.ед. оптической плотности.
Восстановленный и окисленный глутатионы
[Hissin Р. Y., Hilf R., 1976]
Суть метода заключается в способности восстановленного глутатиона (GSH) специфично реагировать с ортофталевым альдегидом при РН=8.0 и образованием флуоресцентного продукта, который может быть активирован при 350 нм с пиком эмиссии при 420 нм. Определение окисленного глутатиона (GSSG) проводили аналогично с ортофталевым альдегидом флуорометрическим методом, но в более щелочной среде (РН=12). Кроме того, для предотвращения окисления GSH и GSSG в пробы добавлен N-этилмалиенит. Условия регистрации флуоресценции идентичны. Измерения проводили на спектрофлуорофотометре Shimadzu RF-5000 (Япония) при А.ех=350нм и А,ет=420нм. Концентрацию GSH и GSSG выражали в ммоль/л.
Молекулярно-генетические исследования
[Маниатис, Т, Фрич, Э. Сембрук, Д., 1984]
Генетические исследования включают в себя три этапа:
1. Выделение ДНК. Важнейший этап идентификации гена - его выделение. ДНК выделяли из образцов цельной венозной крови. Венозную кровь, взятую из локтевой вены, смешивали с антикоагулянтом (6% раствор этилендиаминтетрауксусная кислота, ГОСТ 10652-73).
2. Амплификация
3. Детекция
Этапы выделения ДНК включают: