Экспрессия ранних генов вирусов папиллом человека в опухолях шейки матки

• Автор: Федорова, Мария Дмитриевна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 102 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

Ранние гены вирусов папиллом человека

1.1. Общая характеристика ШСНРУ

1.2.Регуляторная область генома

1.3. Характеристика гена Е6

1.4. Характеристика гена Е7

1.5. Индукция нестабильности генома онкогенами Е6 и Е7

1.6. Характеристика гена Е1
1.7. Характеристика гена Е2
1.7.1. Е2 - регулятор репликации
1.7.2. Е2 - регулятор транскрипции вирусного генома
1.7.3. Е2 - регулятор транскрипции клеточного генома
1.7.4. Роль Е2 в сегрегации вирусного генома в митозе
1.7.5. Прямое взаимодействие Е2 с вирусными и
клеточными белками
1.8. Репликативные факторы Е1 и Е2 и нестабильность клеточного генома
Заключение
Глава 2. Материалы и методы.
2.1. Список использованных реактивов
2.2. Список использованных растворов
2.3. Характеристика клинического материала
2.4. Характеристика клеточных линий
2.5. Одновременноевыделение ДНКи РНК

2.6. Полимеразная цепная реакция
2.6.1. Праймеры
2.6.2. Электорофорез продуктов ПЦР в агарозных гелях
2.6.3. Выделение продуктов ПЦР из агарозного геля
2.7. Клонирование продуктов ПЦР
2.7.1. Реакция лигирования
2.7.2. Трансформация клеток и отбор клонов, содержащих рекомбинантные плазмиды
2.7.3. Выделение гшазмидной ДНК на колонках
2.8. Определение нуклеотидной последовательности ДНК
2.9. Блот-гибридизация продуктов ПЦР по Саузерну
2.9.1. Перенос продуктов ПЦР на нитроцеллюлозную мембрану
2.9.2. Получение зондов ДНК, меченых Р32
2.9.3. Гибридизация с меченым зондом
2.10. Синтез кДНК
2.10.1. Обработка РНК ДНКазой
2.10.2. Реакция обратной транскрипции
2.10.3. Определение старта транскрипции
2.11. Анализ активности ИЕ-кВ методом сдвига подвижности в геле
2.11.1. Получение белковых лизатов
2.11.2. Получение радиоактивно-меченного олигонуклеотида
2.11.3.Реакция связывания НР-кВ с радиоактивно-меченным олигонуклеотидом
2.12. Обработка результатов и статистический анализ
Глава 3. Результаты
3.1. Выявление транскриптов генов El и Е2 HPV 16 в
карциномах шейки матки
3.1.1. Анализ форм персистенции генома HPV 16 методом ПЦР

3.1.2. Анализ транскрипции генов El и Е2 в карциномах
шейки матки методом ОТ-ГШР
3.2. Анализ старта транскрипции мРНК ранних генов
вируса в карциномах шейки матки
3.3. Анализ транскрипции Е2 и структуры сайта интеграции
в HPV 16-позитивной опухоли
3.4. Ген E2HPV16 и экспрессия матриксной металлопротеиназы 9 (ММР-9)
Глава 4. Обсуждение результатов
4.1. Выявление транскриптов гена E1HPV16 в карциномах
шейки матки
4.2. Формы персистенции генома HPV в опухолях
4.3. Структура сайта интеграции
4.4. Экспрессия Е2 и активация транскрипции ММР
Выводы
Список литературы

персистенции генома HPV должна, по-видимому, способствовать
прогрессии опухоли и является одним из её этапов. Для признания продуктов генов El и Е2 факторами дестабилизации генома клетки наряду с онкогенами Е6 и Е7 необходимы дополнительные
исследования по определению характера перестроек ДНК в сайтах интеграции и оценки частоты этого явления в опухолях.
Заключение.
Проявление функций El и Е2, которые могут быть
существенными в процессе канцерогенеза, практически не было
исследовано в опухолях.
Очевидно, что опухоли, экспрессирующие и не экспрессирующие белки El и Е2, несмотря на общий этиологический фактор (HR-HPV), могут существенно различаться между собой по своим свойствам. Исследование экспрессии и функций El и Е2 в опухолях может быть полезным для понимания механизмов вирусного канцерогенеза и определения возможностей применения противовирусной терапии.