Серологическая диагностика крымской геморрагической лихорадки с использованием методов иммуноферментного анализа

• Автор: Трусова, Ирина Николаевна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 137 с. : ил.

Оглавление
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. История изучения Крымской геморрагической лихорадки
1.2. Классификация и таксономия вируса ККГЛ
1.3. Морфология, молекулярная организация и репликация вируса ККГЛ
1.3.1. Характеристика и физико-химические свойства вирионов
1.3.2. Стадии репродукции
1.3.3. Структура и организация генома
1.4. Эпидемиология КГЛ
1.4.1. Распространение вируса ККГЛ
1.4.2. Заболеваемость КГЛ в мире
1.4.3. Заболеваемость КГЛ в Российской Федерации
1.4.4. Сезонность заболеваемости КГЛ
1.4.5. Структура заболеваемости КГЛ
1.4.6. Переносчики и теплокровные хозяева вируса ККГЛ
1.4.7. Пути передачи КГЛ
1.5. Клиническая картина КГЛ
1.6. Патогенез и патологическая анатомия КГЛ
1.7. Лечение
1.8. Профилактика
1.8.1. Неспецифическая профилактика
1.8.2. Специфическая профилактика
1.9. Лабораторная диагностика КГЛ
1.9.1. Вирусологическая диагностика
1.9.2. Молекулярная диагностика
1.9.3. Серологическая диагностика
1.9.3.1.Реакция нейтрализации
1.9.3.2. Реакция связывания комплемента
1.9.3.3. Реакция диффузионной преципитации в агаре
1.9.3.4. Метод флуоресцирующих антител
1.9.3.5. Реакции гемагглютинации и торможения гемагглютинации
1.9.3.6. Реакции непрямой гемагглютинации и торможения непрямой гемагглютинации
1.9.3.7. Иммуноферментный анализ
1.10. Дифференциальная диагностика
Заключение по литературному обзору
Часть II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 1. Материалы и методы
1.1. Вирусы
1.2. Сыворотки крови больных КГЛ, КЭ, ЛЗН
1.3. Иксодовые клещи
1.4. Сахарозо-ацетоновые антигены
1.5. Получение иммунных асцитных жидкостей мышей
1.6. Выделение иммуноглобулинов класса в методом аффинной хроматографии на протеин-А-сефарозе
1.7. Получение пероксидазных конъюгатов иммуноглобулинов перйодатым методом
1.8. Иммуноферментный анализ
1.8.1. ИФА для выявления вирусных антигенов
1.8.2. ИФА-^М
1.8.3. ИФА-1ёС
1.9. Реакция связывания комплемента
1.10. Метод ОТ-ПЦР
1.11. Статистические методы
Глава 2. Характеристика ИФА тест-систем для выявления 1§М и І£(і антител к вирусу ККГЛ, определение эффективности их использования в диагностических целях
2.1. Получение и характеристика антигенов,1 глобулинов и конъюгатов вируса

2.2. Определение эффективности ИФА тест-систем для выявления антител
классов М и G к вирусу ККГЛ
Глава 3. Сравнительная оценка чувствительности и специфичности ИФА тест-систем производства ЗАО «Вектор-Бест» и НИИ вирусологии
им. Д. И. Ивановского при выявлении IgM и IgG к вирусу ККГЛ
Глава 4. Динамика специфических IgM у больных КГЛ
4.1. Суммарные данные по динамике специфических IgM антител, выявляемых в сыворотках крови больных КГЛ в течение месяца от начала заболевания
4.2. Динамика специфических IgM антител в зависимости от клинической формы болезни
4.3. Динамика специфических IgM антител в зависимости от возраста больных
4.4. Динамика специфических IgM антител у мужчин и женщин, больных

4.5. Обследование в ИФА сывороток крови больных КГЛ с летальным исходом
Глава 5. Динамика специфических-IgG.у больных КГЛ
5.1. Суммарные данные по динамике специфических IgG антител, выявляемых в сыворотках крови больных КГЛ в течение месяца от начала заболевания
5.2. Динамика специфических IgG антител в зависимости от клинической формы болезни
5.3. Динамика специфических IgG антител в зависимости от возраста больных
5.4. Динамика специфических IgG антител у мужчин и женщин, больных

Глава 6. Сравнительное применение ОТ-ПЦР и ИФА для специфической
диагностики КГЛ
Глава 7. Определение вероятности заболевания КГЛ в эндемичном регионе среди лиц, покусанных клещами Hyalomma marginatum
вакциной против КГЛ было привито 1946 человек, в том числе 1888 человек из трех районов Ростовской области и 58 сотрудников Ростовской областной санэпидстанции и Института полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР. Наблюдения за привитыми лицами свидетельствовали о незначительной реактогенности этого препарата, обладающего выраженной иммуногенной активностью [58, 59]. Всвязи с резким снижением заболеваемости КГЛ в 1970 г. в Ростовской области оценить эффективность вакцины в эпидемиологическом испытании не удалось.
В течение 1970-1974 гг. профессор С. М. Василенко в Софии разработал вакцину, инактивированную хлороформом. В настоящее время для приготовления вакцины в Болгарии используется штамм ККГЛ У42/81 [136]. Вакцина характеризуется высокой иммуногенностью, безопасностью и успешно применяется в Болгарии в течение многих лет [56, 112, 123, 151]. В 2001-2007 гг. было провакцинировано более 30 000 человек, среди которых не было выявлено заболеваний КГЛ [150].
1.9. Лабораторная диагностика КГЛ
Лабораторная диагностика вируса ККГЛ, как и других вирусных инфекций, базируется на использовании вирусологических, серологических и молекулярнобиологических методов исследования. Легкие и среднетяжелые формы болезни без выраженного геморрагического синдрома диагностируются только с помощью лабораторных методов [35, 139, 145].
1.9.1. Вирусологическая диагностика
Вирусологическая диагностика КГЛ заключается в выделении вируса от больных людей в острый период заболевания. Материалом для выделения служат гепаринизированная кровь,''^сыворотка, плазма, сгусток крови, трупные материалы.
Основным методом выделения вируса ККГЛ является метод внутримозгового заражения н.б.м. 1-2-суточного возраста. Вирус вызывает заболевание и смерть н.б.м. после ю или внутрибрюшинного заражения на 4-6 сутки [160].