Совершенствование лабораторной диагностики краснухи в условиях проведения массовой вакцинопрофилактики

• Автор: Гафаров, Рамиз Рафикович
• Шифр специальности: 03.02.02, 14.03.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 127 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список условных обозначений

Введение .

Глава! Обзор литературы

1.1. Краснуха.

1.2. Эпидемиология краснухи.

1.3. Краснуха у беременных и СВК.

1.4. Серологическая диагностика краснухи.

1.5. Общая характеристика вируса краснухи.

1.6. Структурные белки вируса краснухи.

1.7. Организация генома вируса краснухи. 20 >

1.8. Репликация генома вируса краснухи.
1.9. Особенности гуморального иммунного ответа при краснухе.
1.10. Развитие серологических методов в диагностике краснухи .
1.11. Лабораторная диагностика краснухи в довакцинальный период.
1.12. Лабораторная диагностика краснухи в период элиминации.
1.13. Иммуноферментный анализ в диагностике инфекции краснухи.
1.14. Подтверждающие методы диагностики краснушной инфекции.
1.15. Автоматизированные диагностические комплексы.
1.16. Диагностика краснухи во время беременности.
1.17. Вакцинопрофилактика краснухи.
1.18. Эпидемиология СВК.
1.19. Патогенез СВК.
Заключение
Глава 2 Материалы и методы
2.1. Материалы и реагенты.
2.1.1. Клинический материал .
2.1.2. Стандартные образцы.
2.1.3. Основные реагенты.
2.1.4. Прочие реагенты .

2.1.5. Диагностические тест-системы.
2.2. Буферные растворы.
2.3. Оборудование.
2.4. Методы исследования.
2.4.1. Биохимические методы.
2.4.2. Серологические методы.
2.4.3. Статистические методы и программное обеспечение.
Глава 3. Собственные исследования
3.1. Разработка иммуноферментной тест-системы для количественного выявления IgG антител к вирусу краснухи.
3.1.1. Получение иммуносорбента антигена вируса краснухи.
3.1.2. Оптимизация основных условий проведения иммуноферментного анализа.
3.1.3. Сравнительная оценка антивидовых конъюгатов.
3.1.4. Определение диапазона линейной зависимости оптической плотности от концентрации IgG антител.
3.1.5. Определение оптимального разведения образцов.
3.1.6. Воспроизводимость результатов при количественной оценке уровня IgG-антител к вирусу краснухи.
3.1.7. Оценка диагностической чувствительности ПФТС для определения IgG к вирусу краснухи.
3.1.8. Оценка аналитической чувствительности при определении IgG
к вирусу краснухи.
3.1.9. Оценка распределения уровня IgG к вирусу краснухи в исследуемой популяции.
3.1.10. Оценка диагностической специфичности тест-системы
при выявлении IgG к вирусу краснухи.
3.2. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления IgM антител к вирусу краснухи на основе метода «захвата».
3.2.1. Получение пероксидазного конъюгата на основе краснушного

антигена и оценка его специфической активности.
3.2.2. Получение иммуносорбента для выявления 1§М антител человека методом «захвата».
3.2.3. Определение порогового уровня тест-системы для 1§М к вирусу краснухи.
3.2.4. Оценка специфичности тест-системы для выявления к вирусу краснухи.
3.2.5. Определение чувствительности тест-системы для выявления
к вирусу краснухи.
3.2.6. Исследование стабильности аналитических свойств тест-систем в процессе хранения.
3.3. Исследования популяционного иммунитета к вирусу краснухи различных групп населения (беременные, дети, доноры).
Особенности применения ИФТС в диагностике краснухи.
3.3.1. Сравнительная количественная оценка уровня 1§0 к вирусу краснухи в сыворотке крови с использованием иммуноферментных тест-систем отечественных и зарубежных производителей.
3.3.2. Сравнительная оценка диагностической значимости выявления 1§М к вирусу краснухи с помощью иммуноферментных тест-систем в условиях спорадической заболеваемости.
3.3.3. Исследование напряженности коллективного иммунитета к вирусу краснухи на территории Московской области.
3.3.4. Исследование серопревалентности к вирусу краснухи среди пациентов детской клинической больницы.
3.3.5. Сравнительная оценка уровня антител к вирусу краснухи в сыворотках крови с помощью методов ИФА и РТГА.
3.4. Обсуждение результатов
Выводы
Список литературы

Hofmann G., 2005; Wandinger К-P., 2011). Большинство исследователей рекомендуют для подтверждения диагноза краснухи параллельное использование метода иммуноблоттинга и метода определения низкоавидных антител (Nedeljkovic J. et al., 2001; Wandinger К-P, 2011).
1.15. Автоматизированные диагностические комплексы
На современном этапе развития лабораторного дела все более широкое распространение в мире, и в России, в частности, получают автоматические анализаторы на основе методов иммунохемилюминесценции или иммунофлуоресценции. Подобные диагностические системы производятся рядом зарубежных фирм, таких как Abbott (Arshitect), DiaSorin (Liaison) и др. (Diepersloot R.J.A., 2001). В отличие от наборов ИФА так называемого «планшетного» формата, в качестве элемента твердой фазы в этих тест-системах используются полистироловые или парамагнитные микрочастицы, а для детекции специфических антител используются хемилюминесцентные или флуоресцентные метки (Glenda G. et al.. 1990). Автоматические анализаторы позволяют исключить так называемый «фактор персонала» и значительно сокращают трудозатраты и время исследования. Необходимо отметить, что до последнего времени, в России сравнительных клинических испытаний этих тест-систем не проводилось, такие параметры как чувствительность и специфичность при эксплуатации на территории России несомненно, требуют изучения. Результаты испытаний подобных тест-систем представлены в зарубежных источниках (Eichler R. et al., 2007; Portella G., 2010). Специфичность и чувствительность при выявлении антител к вирусу краснухи была определена на уровне 99% и 98% соответственно. Сравнительные исследования иммунного статуса к вирусу краснухи, проведенные методом латексной агглютинации и с помощью автоматизированных комплексов, показали, что результаты последних требуют критического осмысления (O’Shea S., 1999), особенно в отношении слабоположительных и сомнительных образцов.
Следует отметить, что эффективность использования конкретной тест-системы зависит от множества факторов: соблюдения условий правильной