Гуморальный иммунный ответ осетровых рыб на возбудитель герпесвирусной болезни

• Автор: Прокаева, Инна Борисовна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 172 с. : ил.

Содержание
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
1.1 Актуальность работы
1.2 Степень разработанности проблемы
1.3 Цель и задачи исследований
1.4 Научная новизна результатов исследований
1.5 Теоретическая и практическая значимость работы
1.6 Апробация работы
1.7 Соответствие содержания диссертации паспорту специальности, по которой она рекомендуется к защите
1.8 Публикации
1.9 Структура и объем диссертации
1.10 Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту
1.11 Личный вклад автора в выполнение работы
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 Характеристика герпесвирусной болезни сибирского осетра
2.2 Особенности строения и функционирования иммунной системы рыб
2.2.1 Врожденный и адаптивный иммунитет
2.2.2 Клеточные и гуморальные факторы иммунитета
2.2.3 Иммуноглобулины и продукция противовирусных антител у осетровых рыб
2.2.4 Клеточный иммунный ответ рыб на вирусную инфекцию
2.2.5 Гуморальный иммунный ответ рыб на вирусную инфекцию
2.2.6 Влияние факторов внешней среды на иммунный статус рыб
2.3 Серодиагностика вирусных инфекций рыб
2.3.1 Диагностика герпесвирусной болезни сибирского осетра
2.4 Заключение по обзору литературы

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Материалы
3.1.1 Культуры клеток
3.1.2 Вирус
3.1.3 Рыба
3.1.4 Животные
3.1.5 Нормальные и гипериммунные сыворотки
3.1.6 Реактивы
3.1.7 Лабораторное оборудование
3.2 Методы
3.2.1 Культивирование перевиваемых клеточных линий осетровых рыб
3.2.2 Культивирование вируса в перевиваемых линиях клеток осетровых
рыб и определение его инфекционной активности
3.2.3 Экспериментальное заражение рыб вирусом
3.2.4 Отбор крови и получение сывороток
3.2.5 Выделение вируса от зараженных рыб
3.2.6 Постановка реакции нейтрализации
3.2.7 Гипериммунизация сибирского осетра 8Ь8НУ
3.2.8 Гипериммунизация кроликов иммуноглобулином сибирского осетра
3.2.9 Хроматографические методы исследования
3.2.9.1 Гель-фильтрационное разделение сывороточных белков
3.2.9.2 Ионообменная хроматография
3.2.9.3 Аффинная хроматография
3.2.10 Определение концентрации белка
3.2.11 Получение антивидового кроличьего конъюгата
3.2.12 Приготовление специфических и нормальных культуральных антигенов
3.2.13 Непрямой метод твердофазного иммуноферментного анализа выявления противогерпетических антител у рыб
3.2.14 Статистические методы
4 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1 Воспроизведение герпесвирусной болезни у экспериментально зараженных гибрида СБС, стерляди и сибирского осетра
4.1.1 Содержание вируса в органах и тканях экспериментально зараженных осетровых рыб
4.2 Оптимизация параметров постановки реакции нейтрализации с целью выявления антител в сыворотках крови осетровых рыб
4.2.1 Подбор культуры клеток
4.2.2 Величина рабочей дозы вируса
4.2.3 Температура и продолжительность инкубации смеси вирус-сыворотка
4.2.4 Влияние комплемента
4.3 Динамика уровня вируснейтрализующих антител у переболевших осетровых рыб
4.4 Динамика уровня вируснейтрализующих антител при гипериммунизации сибирского осетра
4.5 Выделение и первичная характеристика иммуноглобулинов сибирского осетра
4.6 Разработка непрямого метода твердофазного иммуноферментного анализа для выявления антител в сыворотках крови осетровых рыб
4.6.1 Приготовление вирусного антигена для твердофазного иммуноферментного анализа
4.6.2 Получение антивидового кролика к иммуноглобулину сибирского осетра
4.6.3 Приготовление антивидовых конъюгатов для проведения непрямого варианта твердофазного иммуноферментного анализа
4.6.4 Определение оптимальных условий постановки ТФ ИФА
4.6.5 Постановка непрямого варианта твердофазного иммуноферментного анализа для выявления антител в сыворотках крови осетровых рыб
4.6.6 Взаимосвязь титров антител против БЬБНУ, выявленных в PH и непрямом варианте ТФ ИФА

рыб, вырабатывающих антитела, считают гитарообразных рыб [47].
Динамика накопления в крови и исчезновения из нее антител после контакта с антигеном или иммуногеном имеет принципиальные характеристики. Особенности этих различий зависят от того, первично или вторично контактирует организм с данным антигеном. Соответственно этому различают первичный и вторичный иммунные ответы.
У высших позвоночных антитела впервые обнаруживаются в крови через 3—4 дня после введения антигена или проникновения возбудителя. В течение этого времени в организме протекают скрытые процессы восприятия антигенного раздражения и его реализации, завершающиеся поступлением иммунных глобулинов в кровь. Этот период называется латентным. После появления в крови первых определимых количеств антител их содержание в течение нескольких дней резко возрастает.
В течение определенного времени поддерживается максимальный уровень иммунных глобулинов в крови (период максимума). Затем их концентрация постепенно снижается (период снижения). Основные отличия вторичного ответа от первичного следующие: укороченный латентный период, более быстрый подъем в период интенсивного роста концентрации антител и большие значения максимальных титров [47, 229, 272].
Вторичный иммунный ответ развивается не только при повторной иммунизации, проводимой через 2—4 нед после первой. Способность к такой усиленной реакции на данный антиген сохраняется в течение многих месяцев и даже лет, служит одним из проявлений иммунологической памяти.
Суммарное количество иммуноглобулинов в сыворотке крови составляет около 2,5 % (сухой остаток), т. е. более 1/3 всех белков. Антитела вырабатываются клетками лимфоидных органов, циркулируют в крови и других жидкостях организма.
Выше указывалось, что являются антителами первичного ответа, т. е. этот класс иммуноглобулинов синтезируется первым после антигенной стимуляции. Через несколько дней происходит переключение синтеза на 1§С.