Изучение формирования сывороточных антител к нейраминидазе пандемического, потенциально пандемического и сезонных вирусов гриппа А в эксперименте и клинических наблюдениях

• Автор: Смолоногина, Татьяна Анатольевна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 190 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Современные представления о строении и функции нейраминидазы вируса гриппа

1.1.1. Структурная организация и антигенные сайты нейраминидазы вируса гриппа

1.1.2. Ферментативная активность нейраминидазы вируса гриппа и

ее роль в репликативном цикле вируса

1.1.3. Патогенез гриппозной инфекции, сопряженный с вирусной нейраминидазой, и факторы его упреждающие

1.2. Методы определения антинейраминидазных антител

1.2.1. Реакция ингибирования нейраминидазной активности

1.2.2. Реакция ингибирования элюирования вируса с эритроцитов и лектин-тест
1.2.3. Реакция постадсорбционной нейтрализации
1.2.4. Радиальная диффузия
1.2.5. Одномерный радиальный гемолиз в агарозном геле
1.2.6. Твердофазный иммуноферментный анализ
1.3. Защитные свойства антител к NA вируса гриппа при экспериментальной инфекции лабораторных животных и птиц
1.4. Роль антинейраминидазных антител в восприимчивости и развитии гриппозной инфекции у людей
1.5. Гетеросубтипический иммунитет, опосредованный антителами к NA
1.6. Формирование иммунного ответа к нейраминидазе вируса гриппа
после противогриппозной вакцинации
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Вирусологические методы
2.2. Методы работы с мышами
2.3. Исследуемые образцы сывороток крови волонтеров
2.4. Серологические методики

2.5. Оценка эволюционных изменений аминокислотных последовательностей и молекулярная филогения
2.6. Статистическая обработка данных
Глава 3. Результаты собственных исследований
3.1. Отработка методик выявления сывороточных антинейраминидазных антител к дрейфовым и шифтовым вирусам гриппа А
3.1.1. Подготовка диагностических реассортантных штаммов на основе вируса А/лошадь/Прага/1/56(117N7), содержащих ЫА эпидемического, пандемического и потенциально пандемического
вирусов гриппа
3.1.2. Изучение биологических свойств диагностических реассортантов
на основе вируса гриппа А/лошадь/Прага/1/56(Н7И7)
3.1.3. Модификация методик, предназначенных для выявления антител к ИА в сыворотке крови, с учетом биологических свойств
диагностических реассортантов
3.1.4. Апробирование модифицированных методик количественной оценки содержания антинейраминидазных антител на сыворотках крови лабораторных животных '
3.2. Применение модифицированных методик выявления антинейраминидазных антител при изучении иммуногенности живой гриппозной вакцины и уровня коллективного иммунитета
3.2.1. Оценка антинейраминидазных антител у волонтеров, привитых сезонной трехвалентной ЖГВ осенью 2005 г
3.2.2. Оценка антинейраминидазных антител в клинических
испытаниях моновалентной ЖГВ против пандемического гриппа А(НШ1).
3.2.3. Оценка антинейраминидазных антител в клинических
испытаниях ЖГВ «Орвакс» подтипа А (Н5Ы2)
3.2.4. Оценка антинейраминидазных антител к пандемическому штамму А(НШ1) у волонтеров, привитых сезонной трехвалентной ЖГВ осенью 2010 г
3.2.5. Уровень коллективного шшунитета к нейраминидазе эпидемического и пандемического вирусов гриппа А(НШ1)

осенью 2010 г
3.3. Защитная эффективность сывороточных антинейраминидазных
антител при моделировании гриппозной инфекции на мышах
Глава 4. Обсуждение результатов
Выводы
Список литературы

специфичности метод радиального гемолиза требует существенных временных затрат и большого количества вируса, не обязательно прошедшего стадию очистки, и даже концентрации, но только в случае гемагглютинирующего титра в аллантоисной жидкости минимум 1:1024, что не всегда достижимо для штаммов с лошадиным Н7. Помимо этого, при постановке реакции с гетерологичной NA в рамках одного подтипа наблюдаются зоны частичного гемолиза с малой интенсивностью и размытыми краями, что затрудняет аккуратное измерение их диаметра и снижает ценность данной методики для выявления и, самое главное, количественной оценки перекрестно-реагирующих антител в образцах сыворотки крови [59].
1.2.6. Твердофазный шшуноферментный анализ Твердофазный иммуноферментный анализ является весьма распространенным методом количественной оценки содержания антител к различным антигенам в пробах биологических жидкостей. Безотносительно исследуемой пары антиген-антитело, этапы постановки ИФА включают в себя иммобилизацию антигена на нерастворимом носителе за счет прямой сорбции на твердую матрицу; контакт исследуемого образца с иммуносорбентом; определение степени специфической
- адсорбции иммуноглобулинов после добавления конъюгата антивидовых антител с

ферментативной меткой и проявления ферментативной реакции.
Применение данного метода для выявления антител к NA вируса гриппа с использованием в качестве антигена очищенного белка или диагностических реассортантных штаммов с нерелевантным НА (подтипов Н6 или Н7) было описано M.W. Khan et al. и К.А. Callow в 1982-83 гг. [37, 90]. Предложенная модификация ИФА демонстрировала большую чувствительность и воспроизводимость в сравнении с классической РИНА, хотя и отличалась большей вариабельностью результатов при многократных повторных измерениях, чем реакция одномерного радиального гемолиза. С другой стороны метод был наименее специфичен, выявляя, к примеру, перекрестное реагирование между антителами к N2 и очищенной N1; между гипериммунной кроличьей сывороткой к штамму A(H1N1) и диагностическим реассортантом A(H7N2), которое сводилось на нет предварительной сорбцией сывороточных иммуноглобулинов вирусом подтипа A(H3N2). Тем не менее, авторы методики считают корректным использование диагностических штаммов с