Особенности реассортации современных штаммов вируса гриппа с донорами аттенуации живой гриппозной вакцины

• Автор: Баженова, Екатерина Андреевна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 122 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
РАЗДЕЛ 1. ВВЕДЕНИЕ
РАЗДЕЛ 2. ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. ВИРУС ГРИППА
1.1.1 Структура вируса гриппа А и В
1.1.2 Генетическая изменчивость вируса гриппа. Феномен реассортации
1.1.3 Методы оценки состава генома вируса гриппа
1.2. ПРОФИЛАКТИКА ГРИППА
1.2.1. Химиопрофилактика
1.2.2. Инактивированные гриппозные вакцины
1.2.3. Живые гриппозные вакцины
1.2.4. Достоинства и недостатки живых и инактивированных гриппозных 25 вакцин
1.2.5. Другие виды вакцин
1.3. ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ГРИППА
1.3.1. Способность вируса гриппа к размножению за верхними и нижними
пределами температурного оптимума
1.3.2. Чувствительность вируса гриппа к неспецифическим ингибиторам
сыворотки крови
1.4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ К ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. РАЗРАБОТКА МЕТОДА МИКС-ПЦР ДЛЯ АНАЛИЗА СОСТАВА ГЕНОМА
ШТАММОВ СЕЗОННОЙ И ПАНДЕМИЧЕСКОЙ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ
3.1.1. Подбор программ и праймеров для скрининга реассортантных
штаммов вируса гриппа типа А и В
3.1.2. Праймеры для идентификации генов, принадлежащих сезонным
штаммам вируса гриппа A (H1N1) и A (H3N2)
3.1.3. Праймеры для идентификации генов, принадлежащих сезонным
штаммам вируса гриппа В
3.1.4. Праймеры для идентификации генов, принадлежащих пандемическим
или потенциально пандемическим штаммам вируса гриппа А (НШ1) и
(Н 5 N1)
3.1.5. Описание метода микс-ПЦР
3.1.6. Заключение
3.2. ОСНОВНЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СОВРЕМЕННЫХ ВИРУСОВ
ГРИППА, ВЛИЯЮЩИЕ НА ПОДГОТОВКУ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ
ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ
3.2.1. Анализ репродукции современных вирусов гриппа при различных температурах инкубации
3.2.2. Анализ чувствительности вирусов гриппа к неспецифическим ингибиторам нормальной сыворотки крови
3.2.3. Заключение
3.3. СЛОЖНОСТИ ПОДГОТОВКИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ ЖИВОЙ
ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ СОВРЕМЕННЫХ СЕЗОННЫХ И
ПОТЕНЦИАЛЬНО ПАНДЕМИЧЕСКИХ ВИРУСОВ ГРИППА
3.3.1. Сравнительный анализ наследования реассортантными штаммами генов от донора аттенуации или от вируса гриппа «дикого» типа разных лет выделения
3.3.2. Характер наследования реассортантами нейраминидазы от «диких» вирусов гриппа, обладающих са- или /5-фенотипом
3.3.3. Характер наследования реассортантами нейраминидазы от «диких» вирусов гриппа, обладающих ингибиторочувствительным фенотипом
3.3.4. Роль нейраминидазы в формировании ингибиторочувствительного фенотипа
3.3.5. Заключение
3.4. ОСОБЕННОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ 115141-РЛ8-ЯО РЕАССОРТАНТОВ В
КАЧЕСТВЕ ИСТОЧНИКА ПОВЕРХНОСТНЫХ АНТИГЕНОВ ДЛЯ
ПОДГОТОВКИ ПОТЕНЦИАЛЬНО ПАНДЕМИЧЕСКИХ ШТАММОВ
ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ
3.4.1. Особенности использования Н5М1-РИ8-1Ю реассортантов в качестве «диких» вирусов для скрещивания с донорами аттенуации
3.4.2. Особенности использования РЯ8-1Ш реассортантов для сезонной инактивированной вакцины в качестве «диких» вирусов для скрещивания с донорами аттенуации
3.4.3. Особенности использования низкопатогенных вирусов гриппа птиц А(И5Ы2) в качестве «диких» вирусов для скрещивания с донорами аттенуации
3.4.4. Особенности использования низкопатогенных вирусов гриппа птиц А(Н5Ш) в качестве «диких» вирусов для скрещивания с вакцинным штаммом против гриппа А(НШ1)рбт
3.4.5. Заключение
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
РАЗДЕЛ 3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА
СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
В/60 донор аттенуации В/СССР/60/
ВОЗ Всемирная организация здравоохранения
ЖГВ живая гриппозная вакцина
ИГВ инактивированная гриппозная вакцина
ИУ ингибитороустойчивый
ИЧ ингибиторочувствительный
Лен/17 донор аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2)
ОТ-ПЦР обратная транскрипция с полимеразной цепной реакции
ПЦР полимеразная цепная реакция
РГА реакция гемагглютинации
РКЭ развивающиеся куриные эмбрионы
РТГА реакция торможения геммаглютинации
ХА холодоадаптированный
ЭИД50 50%-ная эмбриональная инфицирующая доза вируса
att, «//-фенотип (attenuation) аттенуация, аттенуирующий фенотип
са, са-фенотип (cold-adaptation) холодоадаптированность
НА гемагглютинин
реассортант, подготовленный на основе высокоурожайного Indo/5 (H5N1) вируса A/PR/8/34 (H1N1) (PR8) и вирусов гриппа птиц
A/Indonesia/05/2005 (H5N1)
NA нейраминидаза
реассортант, подготовленный на основе высокоурожайного NIBRG-23 (H5N1) вируса A/PR/8/34 (Н1N1) (PR8) и вирусов гриппа птиц
A/turkey/Turkey/1/2005 (H5N1)
PR8 «дикий» вирус A/PR/8/34 (H1N1)
репродуктивная способность при различных температурах

(reproductive capacity at different temperatures)
RDE receptor-destroying enzyme
RFLP полиморфизм длин рестрикционных фрагментов
температурочувствительность (неспособность к репродукции
Is, /5-фенотип
при температуре выше оптимальной, temperature sensitivity) реассортант, подготовленный на основе высокоурожайного VN1203 (H5N1) вируса A/PR/8/34 (H1N1) (PR8) и вирусов гриппа птиц
A/Veitnam/1203/2004 (H5N1)
WT «дикий» (эпидемический) вирус

1.4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ К ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ
За последние 20-30 лет опубликовано множество работ, посвященных доклиническим и клиническим испытаниям живых гриппозных реассортантных вакцин [65, 110, 168 и др.]. Убедительно доказана роль определенных генов в аттенуации ЖГВ [21], ведутся активные разработки противогриппозных вакцин нового поколения [93, 116, 124], раскрыты механизмы репликации вируса гриппа, достигнуты грандиозные успехи в изучении структуры и функин вирусных белков [100, 115, 138, 201] и т. д.
С другой стороны, целый пласт вопросов остался не освещенным в научной литературе. В частности, причины, по которым одни вирусы легко вступают в реассортацию, а другие - нет, до настоящего момента не известны. На эту тему опубликована всего одна работа, датируемая 1995 годом [187], в которой описаны сложности получения реассортантов заданной формулы генома. Зависимость эффективности реассортации от конкретных биологических свойств скрещиваемых вирусов практически не изучалась. Неизвестно, принимают ли другие вирусные белки, кроме гемагглютинина, участие в формировании устойчивости к неспецифическим ингибиторам, и если да, то какие.
Вопрос о том, каким же должно быть оптимальное соотношение фенотипических признаков «дикого» родительского вируса, используемого для подготовки живой гриппозной реассортантной вакцины, был очень вскользь затронут только в одной работе [129], в которой авторы предлагали до скрещивания с донором аттенуации клонировать «дикий» родительский вирус при повышенной температуре для придания ему большей вирулентности. Последняя публикация, в которой подробно описываются фенотипические свойства циркулирующих штаммов вируса гриппа, датируется 2006 годом [26].
Таким образом, анализ имеющейся литературы не позволяет' сделать однозначный вывод о том, какое влияние определенные биологические свойства современных штаммов вируса гриппа могут оказывать на их способность к реассортации с холодоадаитированнымн донорами аттенуации живой гриппозной вакцины; какие сложности возникают при подготовке вакцинных штаммов на основе современных сезонных н потенциально пандемических вирусов гриппа и каковы пути их преодоления.
Все вышесказанное и послужило предпосылками для нашего исследования.