Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Гайдукова, Софья Евгеньевна
03.01.06
Кандидатская
2011
Москва
106 с. : ил.
Стоимость:
499 руб.
Оглавление
Оглавление
СПИСОК ИЛЛЮСТРАЦИЙ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Рясковые
1.1.1 Систематика, эволюция и географическое распространение
1.1.2 Ботаническое описание и особенности строения
1.1.3 Размер генома и генетический анализ
1.1.4 Биохимия и молекулярная биология
1.1.5 Возможности использования растений ряски для научных и
коммерческих целей
1.2 Генетическая инженерия растений ряски
1.2.1 Виды растений Lemnaceae, используемые в культуре клеток
1.2.2 Типы эксплантов, используемые для каллусообразования и регенерации
1.2.3 Среды и условия для индукции каллусообразования и регенерации
1.2.4 Другие факторы, влияющие на регенерацию и каллусообразованне
1.2.5 Пре-культивация
1.2.6 Поранение экснланта
1.2.7 Морфология листецов и каллуса
1.2.8 Генетическая инженерия
1.2.9 Воспроизводимость опытов
1.3 Растения — биофабрики: производство фармацевтических
рекомбинантных белков.
1.3.1 Метаболическая инженерия растений
1.3.2 Создание растений с улучшенными лечебно-диетическими свойствами
1.3.3 Конструирование трансгениых растений - продуцентов целевых белков
1.3.4 Рекомбинантные белки, экспрессируемые в растениях
1.3.5 Экспрессия рекомбинантных антител в трансгенных растениях
1.3.6 Синтез субъединичных вакцин в трансгенных растениях
1.3.7 Продукты молекулярного биофарминга
II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Растительный материал
2.2 Методы ведения культуры ряски in vitro
2.2.1 Среды, использованные в работе для поддержания растений культуры
in vitro и трансформационного процесса
2.2.2 Состав и методика приготовления компонентов питательных сред
2.2.3 Получение асептической культуры ряски
2.2.4 Индукция каллусообразовання
2.2.5 Индукция регенерации растений из каллуса
2.3 Культура агробактерии
2.3.1 Бактериальные штаммы и плазмиды
2.3.2 Состав и способ приготовления среды для агробактериальных штаммов
2.3.3 Подготовка агробактериальной культуры к трансформации
2.4 Трансформация и селективный отбор растений
2.4.1 Со-кулътивацкя эксплатов с Agrobacteriшn ^umefaciens
2.4.2 Определение оптимальной концентрации селективного агента
2.5 Молекулярно-генетический анализ
2.5.1 Выделение ДНК из растительного материала
2.5.2 ПЦР-анализ первичных трансформантов
2.5.3 Определение экспрессии гена баг
2.5.4 Саузерн-блот анализ трансгенных растений
2.6 Статистическая обработка данных
III РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Получение асептического материала
3.2 Подбор состава питательной среды для культивирования
3.3 Определение оптимальных концентраций селективных агентов
3.4 Определение оптимальных параметров агробактериальной трансформации на основе транзиентной экспрессии маркерных генов
3.5 Получение трансгенных растений ряски с геном Ьаг
3.5.1 Изучение влияния состава питательной среды, типа экспланта и
регуляторов роста растений на процесс каллусообразовання
3.5.2 Регенерация листецов из морфогенного каллуса
3.5.3 Определение оптимальных параметров агробактериальной трансформации фрагментов каллуса на основе транзиентной экспрессии маркерных генов
3.6 Молекулярный анализ полученных трансформантов
IV Выводы
V Список литературы
СПИСОК ИЛЛЮСТРАЦИЙ
СПИСОК ИЛЛЮСТРАЦИЙ
Рисунок 1 — Кладограмма видов Рясковых Рисунок 2 — Схематичное строение растения ряски Рисунок 3 — Листецы ряски малой на средах без селективного агента (справа) и с 8 мг/л фосцинотрицина (слева) через б недель культивирования Рисунок 4 — Листецы ряски малой на средах без селективного агента (справа) и с 100 мг/л канамицина (слева) через 6 недель культивирования
Рисунок 5 — Транзиентная экспрессия гена gfp на 3 сутки при использовании в качестве экспланта целого (слева) и половины листеца (справа)
Рисунок 6 —Увеличение размера гиалиновой нити через 3 недели от начала культивирования
Рисунок 7 - Морфогенный каллус Lemna minor (12 недель с момента индукции)
Рисунок 8 - Смесь каллусных культур Рисунок 9 — Регенерация побегов из каллуса
Рисунок 10 — Транзиентная экспрессия маркерного гена gfp фрагментов каллуса
Рисунок И — Электрофоретический анализ результатов ПЦР в 1%-м агарозном геле
Рисунок 12 — Анализ экспрессии гена bar фермента фосфинотрицин-N-ацетил трансферазы (pat) с помощью TRAIT LL Lateral Flow Test kit
Рисунок 13 — Схема Т-ДНК вектора и результаты Саузерн блот анализа
Таблица 11 Литературные данные по регенерации и трансформации растений семейства Рясковые
№ Вид растения (эксплант) Способ трансформации, гены, (частота трансформации %) Среды для пролиферации листецов. Среды для индукции каллусообразования (частота каллусообразования, %) Среды для регенерации (частота регенерации побегов, %) Автор
1 Lemna gibba (ли-стец) Schenk&Hildebrandt Murashige&Skoog, 3% сахарозы (10%), 1 рМ 2,4-D + 10 рМ NAA + 10 рМ GA3 + 2pM ВА; 20 рМ 2,4-D + 10 рМ NAA + 10 рМ GA3 + 2 рМ В А (8,5%-9,1%) БсЬепк&ШбеЫш^к 1 рМ ВА (100%) Х.К. Мун и А.-М. Стомп, 1997 (Moon Н.К. et al., 1997)
2 Lemna minor L. (листец; половинка листеца; листец с поранением в меристему; сегмент корня) Wang, без агара Murashige&Skoog, 45 рМ 2,4-Д (89,11%) Murashige&Skoog, 22 рМ ИУК, 4,6 рМ кинетин (100%) Стефаниак и др., 2002 (Stefaniak В. et al., 2002)
3 Spirodela oligorrhizza Hegelm SP (мате- — WP, 1,5% галактоза, 50 мг/л дикамба WP, 2% сорбитол + 1% мальтоза + WP, 0,5% сахароза + 1 мг/л Т ХУХ Ли Дж. и др., 2004 (Li J. et al.,
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Биотехнологические экспресс-методы в микробиологии и вирусологии | Макарян, Эдуард Артемович | 2011 |
Анионная пероксидаза табака : получение рекомбинантного фермента и его применение как компонента биоаналитических систем | Захарова, Галина Сергеевна | 2015 |
Роль мембранных транспортных белков в регуляции продукции цефалоспорина C у Acremonium chrysogenum | Думина, Мария Владимировна | 2013 |