Получение антигенов и использование их для разработки средств диагностики и профилактики вирусных инфекций

• Автор: Агафонов, Александр Петрович
• Шифр специальности: 03.01.06, 03.02.02
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 333 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Современные тенденции в подходах к созданию вакцин против геморрагических

лихорадок

1.1.1. Общие сведения и эпидемиология филовирусов.

1. 1.2. Структурнофункциональные свойства филовирусов

1.1.3. Факторы иммунной системы, определяющие эффективность вакцин против

геморрагических лихорадок.

1.1.4. Рекомбинантные и ДНКвакцины против филовирусных геморрагических лихорадок.

1.2. Программа ВОЗ ликвидации кори задачи здравоохранения.

1.2.1. Контроль над заболеваниями корь и эпидемический паротит профилактика вакцинными препаратами
1.2.2. Альтернативные методы вакцинации .
1.2.3. Методы контроля эффективности вакцинации и серологическая диагностика
кори и эпидемического паротита
1.2.4. Молекулярноэпидемиологический контроль. Генетический анализ штаммов
вирусов кори и паротита.
Глава 2. ИСХОДНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ
2.1. Исходные материалы
2.2. Основные методы.
Глава 3. ПОЛУЧЕНИЕ АНТИГЕНОВ ВИРУСА МАРБУРГ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ИММУНОГЕННЫХ СВОЙСТВ 1 зз
3.1. Идентификация штамма Рорр вируса Марбург
3.2. Видоспецифичность штамма Рорр вируса Марбург
3.3. Подбор условий культивирования вируса Марбург.
3.4. Способы и источники получения вируса Марбург
3.5. Подбор условий концентрирования и очистки вируса Марбург
3.6. Изучение иммуногенных свойств белков вируса Марбург.
3.7. Изучение протективных свойств белков вируса Марбург.
3.8. Изучение свойств синтетических пептидов аналогов участка гл и коп и но в
вируса Марбург и вируса Эбола
Глава 4. РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ПРОФИЛАКТИКИ КОРИ
4.1. Препарат вакцины для перорального применения
4.2. Препарат ДНКвакцины для профилактики кори.
Глава 5. ПОЛУЧЕНИЕ АНТИГЕНОВ ВИРУСА КОРИ И РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ
ДИАГНОСТИКИ НА ИХ ОСНОВЕ
5.1. Актуальность диагностики коревой инфекции и серомониторинга
противокоревой профилактики.
5.2. Иммунофермснтная тестсистема .тля определения антител класса к вирусу кори.
5.2.1. Подбор условий культивирования, концентрирования и очистки вируса кори
5.2.2. Выбор штамма вируса корн для создания ИФТС
5.2.3. Оптимизация условий проведения ИФА
5.2.4. Определение чувствительности и специфичности тестсистемы.
5.3. Панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела к вирусу кори.
5.3.1. Разработка сероконверсионной панели сывороток.
5.3.2. Разработка стандартной панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу кори Стандарт корь.
5.3.3. Разработка рабочей панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса М к вирусу кори.
5.4. Модернизация и испытания ИФТС для скрининга иммунитета к вирусу кори
5.4.1. Дизайн тестсистемы.
5.4.2. Производство ИФА тестсистемы IДС.
5.4.3. Испытания Тестсистемы иммуноферментной для количественного определения антител класса к вирусу кори полевые, в Глобальной сети лабораторий ВОЗ и Государственные испытания.
5.5. Разработка иммуноферментной тестсистемы для выявления антител класса М к
вирусу кори КорьI
Глава 6. ПОЛУЧЕНИЕ АНТИГЕНОВ ВИРУСА ПАРОТИТА И РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ДИАГНОСТИКИ НА ИХ ОСНОВЕ
6.1. Диагностика паротитной инфекции и оценка эффективности мероприятий по профилактике эпидемического паротита.
6.2. Иммуноферментная тестсистема для определения антител класса к вирусу паротита.
6.2.1. Штамм Драгун вируса паротита.
6.2.2. Серологические свойства штамма Драгун вируса паротита.
6.2.3. Подбор условий культивирования вируса паротита
6.2.4. Выбор штамма вируса паротита для использования в ИФТС
6.2.5. Оптимизация условий проведения ИФА для определения антител класса к
вирусу паротита.
6.2.6. Изучение сроков хранения тестсистемы для определения антител класса к
вирусу паротита.
6.2.7. Определение эффективности чувствительности и специфичности
иммунофсрмеитной тестсистемы для определения антител класса к вирусу паротита.
6.3. Разработка панели сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу паротита
Глава 7. ИЗУЧЕНИЕ ШТАММОВОГО РАЗНООБРАЗИЯ ВИРУСОВ КОРИ И
ПАРОТИТА, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ
7.1. Выделение, изучение серологических свойств, определение нуклеотидной последовательности штаммов вируса кори, циркулирующих на территории Западной Сибири.
7.2. Выделение, изучение серологических свойств, определение первичной нуклеотидной последовательности штаммов вируса паротита, циркулирующих
на территории Западной Сибири
Благодарности
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Доказательством продолжительной циркуляции филовирусов на Африканском континенте могут служит, ранние работы но исследованию сыворотки крови людей, проживающих в различных странах Африки. Марбург были выявлены в Либерии у 1,5 ,1 обследованных людей I . Зимбабве у 0,8 . Центральноафриканской Республике у 0,6 2,4 i. Кении 0, . В работе . Центральноафриканской Республики, Конго, Экваториальной Гвинеи и Габона. Среди животных антитела против вируса Марбург были выявлены у 4 из 6 обследованных зеленых мартышек и у 1 из 4 павианов в Кении В. К. . ЦснтральиоАфриканской республике . В . I , . Интересные данные получены i и соавторами г Сыворотки около импортированных в США с Филиппин обезьян Масаса , Масаса ii были исследованы на наличие антител к вирусам семейства ivii методом флуоресцирующих антител. Оказалось, что примерно всех животных имеют антитела к представителям семейства ivii СПС, . Кроме того исследования 0 работников карантинной службы и вивария, имеющих непосредственный контакт с обезьянами, выявили высокий процент 7,6 серопозитивиых хотя бы к одному из филовирусов сывороток. Сыворотки тестировали методом флуоресцирующих антител и анализом . Обезьяны были причиной возникновения инцидентов филовирусных геморрагических лихорадок в Марбурге, Германия, и в Рестоне, США, однако передача вируса людям в естественных условиях до сих пор не подтверждена, исключая случаи инфицирования в процессе охоты, разделывания или потребления мяса обезьян i, , i. Таким образом, исходя из этих данных, ареал
распространения вируса Марбург может включать территорию стран Кения, Уганда, Центральноафриканская Республика, Либерия, Зимбабве, Чад, Конго, Экваториальная Гвинея, Габон и Камерун. Природный резервуар вируса Эбола неизвестен, но, по всей видимости, он также находится во влажных лесах африканского континента и в Западной части Тихого океана. Нсчеловскообразиые приматы, которые являются источником инфекции для людей, не считаются резервуаром. Считается, что подобно людям они инфицируются непосредственно из природного резервуара или через цепь передачи инфекции из природного резервуара. На африканском континенте случаи инфицирования людей вирусом Эбола связывают с прямым контактом с гориллами, шимпанзе, обезьянами, лесными антилопами и дикобразами, обнаруженными мертвыми во влажных лесах. На сегодняшний день вирус Эбола был обнаружен в природе в трупах шимпанзе в КотдИвуаре и Республике Конго, горилл в Габоне и Республике Конго и антилоп в Республике Конго ii 3ix. Математические модели, основанные на наложении случаев заболевания филовирусными геморрагическими лихорадками на ареал распространения потенциальных природных носителей рис. Хорошие результаты по определению ареала распространения филовирусов показал метод моделирования экологической ниши i i i, предложенный в г. А.Т. А.Т. Они предложили ряд критериев, на основании которых были отобраны потенциальные природные носители вирусов Эбола и Марбург рис. С помощью модели были предсказаны зоны, в которых вероятность возникновения вспышек заболевания наиболее высока. Рис. Потенциальные, рассчитанные на основе математических моделей, зоны распространения вируса Марбург Л модель г. Б модель г. А.Т. Л.Т. Структурнофункциональные свойства филовирусов. Вирионы имеют сложную структуру и состоят из поверхностных белков, нуклеокапсида с полимеразным комплексом и матричного белка. По форме вирионы палочкообразны само семейство, в которое входит вирус Марбург, получило название от слова i длинный, протяженный, плеоморфны и могут иметь также или 6 образную форму. Впервые РНК вируса Эбола была выделена и соавторами . РНК вируса Эбола имеет мол. Ю6 Да. Вирусы содержат один спиральный нуклеокапсид, окруженный липопротеидной мембраной. Некоторые частицы имеют ответвления. Наружный диаметр частиц составляет нм, средняя длина 0 нм, однако встречаются частицы длиной до нм. Снаружи вирион имеет оболочку толщиной примерно нм. Нуклеокапсид состоит из центральной осевой нити, диаметром нм, которая заключена в спиральный капсид, образующий цилиндр диаметром нм.