Сборка трастузумаб (герцептин)-связывающих наночастиц вируса табачной мозаики в листьях : Nicotiana benthamiana

• Автор: Петруня, Игорь Валерьевич
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 112 с. : ил.

1. ОГЛАВЛЕНИЕ
2. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
4. ЦЕЛИ ИССЛЕДОВАНИЯ
Продукция целевых белков в растениях с использованием транзиентной системы экспрессии.
Агроинфскция
Транзиентная система экспрессии на основе Agrobacter^um Ште/ааепя
Векторы на основе вирусов растений
Тобамовирусы
Потивирусы
Бромовирусы
Комопнрусы
Г еминивирусы
Система экспрессии MagnICON
Вирусоподобные частицы, получаемые в растениях
Экспонирование эпитопов вакцинных белков на поверхности вирионов растительных вирусов
5. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
6. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Исследование сборки трастузумаб-связываюших наночастиц ВТМ в листьях А'. ЬеМИатіапа.
Изучение возможности трансформации клеток мыши при бакгериемии А. Іите/асіею
7. ВЫВОДЫ
8. БЛАГОДАРНОСТИ
9. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

2. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Названия вирусов и штаммов:
AMV - Alfalfa mosaic virus, вирус мозаики люцерны;
BVDV - bovine viral diarrhea virus, вирус вирусной диареи рогатого скота; CaMV - cauliflower mosaic virus, вирус мозаики цветной капусты;
CrPV - cricket paralysis virus, вирус паралича сверчка;
crTMV - crucifer-infecting tobamovirus, тобамовирус крестоцветных;
CSFV - classical swine fever virus, вирус классической лихорадки свиней; CMV - cucumber mosaic virus, вирус мозаики огурца;
CPMV, Cowpea mosaic virus; вирус мозаики коровьего горошка;
EMCV - encephalomyocarditis virus, вирус энцефаломиокардита;
HCV - hepatitis virus С, вирус гепатита С;
PSIV - Plautia stali intestine virus, пикорнаподобный вирус насекомых;
PLRV - potato leaf roll virus, вирус скручиваемости листьев картофеля;
PVA - potato virus A, A-вирус картофеля;
PVY - potato virus Y, Y-вирус картофеля;
PVX - potato virus X, Х-вирус картофеля;
rTMV - recombinant tobacco mosaic virus, рекомбинантный BTM;
SV40 - simian virus 40, обезьяний вирус 40;
TEV - tobacco etch virus, вирус гравировки табака;
TMVui - tobacco mosaic vims, вирус табачной мозаики штамм Ul;
TBSV - tomato bushy stunt virus, вирус кустистой карликовости томатов; TuMV - turnip mosaic vims, вирус мозаики турнепса;
TYMV - turnip yellow mosaic vims, вирус желтой мозаики турнепса;
TMGMV - tobacco mild green mosaic vims, вирус мягкой зеленой мозаики табака;
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека;
BTM - tobacco mosaic vims вирус табачной мозаики;

ХВК - Х-вирус картофеля.
Другие сокращения:
а.о. — аминокислотный остаток
БО — белок оболочки
БСА — бычий сывороточный альбумин
ВИУГ - вирус-индуцируемое «умолкания»
вРНК - вирусная РНК
ГМФ - гуанозинмонофосфат
гРНК - геномная РНК
ГТФ - гуанозинтрифосфат
ДСН - додецилсульфат натрия
кДНК — комплементраная ДНК
мРНК - матричная РНК
нт — нуклеотид
НТО - нетранслируемая область ОРТ — открытая рамка трансляции ПААТ — полиакриламидный гель ПК — промежуточная конструкция ПЦР - полимеразная цепная реакция ПЭГ - полиэтиленгликоль РЕП - репликаза РНП - рибонуклеопротеид рРНК - рибосомальная РНК РМЖ - рак молочной железы СГП - субгеномный промотор сгРНК - субгеномная РНК ТБ - транспортный белок тРНК - транспортная РНК
При разработке векторов на основе вируса мозаики коровьего горошка возможно использование лишь РНК-2. При этом применяют два подхода. Первый подразумевает вставку целевого гена в область РНК-2, при сохранении возможности участвовать в системном транспорте. При втором, более эффективном, целевой ген помещается в С-концевую область полипротеина, кодируемого РНК-2. При дальнейшем процессинге целевой белок выщепляется из полипротеина при помощи каталитического белка 2А (Gopinath et а/., 2000). Это позволяет использовать вставки большего размера, но при этом утрачивается способность вируса к транспорту. Данная система разработана на основании исследований, в результате которых было определено, что последовательности, необходимые для репликации РНК-2, расположены исключительно на 5' и 3' концах РНК, что позволяет затрагивать ОРС РНК-2 без потери способности к репликации.
Отсутствие присущего нативному вирусу супрессора сайленсинга -минус данной системы (Liu et а!., 2004). Решением данной проблемы является добавление супрессора (HcPro Y вируса картофеля) в систему. Это делается с помощью метода агроинфильтрации, позволяющего доставлять в клетку растения одновременно несколько генетических конструкций. Использование «сокращенного» варианта РНК-2 дает высокий выход целевого белка и явно выгоден в случае производства антител (Sainsbury et ah, 2006). Кроме того, были разработаны бинарные векторы, упрощающие стадии клонирования и экспрессии векторов на основе вируса мозаики коровьего горошка.
Г еминивирусы
Геном вирусов этого семейства представляет собой одно цепочечную кольцевую ДНК, которая реплицируется в ядре клеток инфицированного растения. Благодаря этим уникальным особенностям, была признана потенциальная возможность использования ДНК-содержащих геминивирусов как внехромосомных амплифицирующихся векторов для экспрессии целевых