Спектр мутационных повреждений гена рецептора липопротеидов низкой плотности в популяции больных семейной гиперхолестеринемией г. Санкт-Петербурга

• Автор: Шакир Хамид
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 91 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Семейная гиперхолестеринемия
1.2. Структура рецептора ЛПНП
1.3. Структура гена рецептора ЛПНП
1.3.1. Соотношение ген-белок
Г. 3.2. Транскрипционная регуляция гена
рецептора ЛПНП
1.3.3. Полиморфизмы рецептора ЛПНП
1.4. Сцепление мутационных дефектов РЛПНП с

1.5. Классификация мутации в рецепторе ЛПНП
1.6. Общая стратегия изучения СГ
1.6.1. Идентификация крупных перестроек в гене
РЛПНП
1.6.2. Первичная идентификаций точечных мутаций
1.6.3. Молекулярный скрининг охарактеризованных мутаций в популяции
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
II. 1. Материалы
II.2. Характеристика обследованных групп
II. 3. Молекулярно-генетические методы
11.3.1. Выделение ДНК из периферической крови
11.3.2. Полимеразная цепная реакция(ПЦР)
11.3.3. Анализ конформационного полиморфизма
однонитевых фрагментов ДНК
11.3.4. Очистка ПЦР-фрагментов для секвенирования
11.3.5. Определение нуклеотидной последовательности ДНК по Сенгеру
11.3.6. Секвенирование с помощью специального набора (AmpliCycle™ sequencing kit)46
II. 3.7. Рестрикционный анализ
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВІІВОДЬІ Т
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Апо В Апо С апо Е АХАТ
ГМГ-Ко А-редуктаза

кднк
лпвп
лпнп
лпонп
ПДРФ

РЛПНП

хс лпвп хс лпнп хс лпонп

М-СБР

БЛЕВР
ББСР
- аминокислота
• аполипопротеин В аполипопротеин С
- аполипопротеин Е
- ацил-коА-холестерин-ацилтрансфераза
- (3-гидрокси, (3 -метилглутарил-коэнзим а редуктаза
- ишемическая болезнь сердца
- индекс гетерогенности
- липопротеины
- комплементарная ДНК
- липопротеины высокой плотности
- липопротеины низкой плотности
- липопротеины очень низкой плотности
- полиморфизм длин рестрикционных фрагментов
- полимеразная цепная реакция
- рецептор липопротеидов низкой
плотности
- семейная гиперхолестеринемия
- триглицериды
- хиломикроны
- холестерин
- холестерин липопротеидов высокой плотности
- холестерин липопротеидов низкой плотности
- холестерин липопротеидов очень низкой плотности
- эфиры холестерина
- эпидермальный фактор роста
- макрофагальный колоний-стимулирующий фактор
- однонуклеотидный полиморфизм
- белок, связывающий стероидный регуляторный элемент
- конформационный полиморфизм однонитевых фрагментов ДНК

ВВЕДЕНИЕ
Атеросклероз является основной причиной развития ишемической болезни сердца (ИБС) и других сердечно-сосудистых заболеваний, приводящих к инвалидности и ранней смертности в большинстве популяций[ 1 ]
Атеросклероз - прогрессирующая болезнь крупных артерий, которая реализуется при взаимодействии генетических и средовых факторов.
Методы классической генетики, и, прежде всего, генеалогический анализ, позволили прийти к заключению о важной роли наследственных факторов в генезе атеросклеротического поражения сосудов. Однако механизмы наследственной предрасположенности к развитию атеросклероза остаются недостаточно изученными.
Холестериновая концепция атеросклероза была предложена H.H. Аничковым более 80 лет тому назад [2]. В 1939 г. Карл Мюллер, продолжая работу Аничкова, выдвинул теорию о том, что в основе увеличенного уровня холестерина в крови, появления ксантом и ряда сердечных заболеваний лежат генетические дефекты.
В течение последних двух десятилетий благодаря эпидемиологическим исследованиям накопилось большое количество информации об ассоциации уровня липопротеидов плазмы с развитием атеросклероза у человека.
Первоначально было подтверждено, что атеросклероз тесно связан с высокими концентрациями холестерина, особенно

Метод годен для крупных амнлифицированных фрагментов до 600 п.н. и его эффективность достигает 95 %.
Используется также анализ гетеродуплексов, образовавшихся путем слияния нормального и мутантного фрагментов. При форезе гетеродуплекс мигрирует со скоростью меньшей, чем оба гомодуплексных фрагмента ДНК (нормальный и мутантный), полученных с помощью ПЦР, за счет конформационных особенностей в местах несовпадения нуклеотидов.
При анализе фрагментов ДНК менее 300 п.н. вероятность идентификации точечных мутаций может достигать 80-90%[112].
CMC (Chemical Mismatch Cleavage) - метод химического расщепления некомплементарных сайтов - основан на способности некоторых химических агентов специфически разрывать нить ДНК в месте локализации неспаренного основания [122,123].
Современные модификации метода СМС позволяют идентифицировать до 95-100% мутаций[124]. Большими преимушествами этого метода являются: возможность исследовать
протяженные участки ДНК до 2 тпн. и способность одновременно выявить и локализовать несколько мутаций в одном фрагменте ДНК.
Описанные методы обнаружения мутаций предполагают обязательное секвенирование содержащих их сегментов ДНК с целью точной идентификации нуклеотидных нарушений, оценки их фенотипического проявления и определения причастности к развитию болезни.