Выделение и свойства изоформ УДФ-Д-галактозо-4-эпимеразы и УДФ-Д-глюкозопирифосфорилазы из Pisum sativum и Caldieria sulphuraria

• Автор: Проселков, Павел Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 122 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

I. ВВЕДЕНИЕ
П. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Метаболизм галактозы у животных и микроорганизмов

Глава 2. Пути метаболизма галактозы у растений и её токсич-цбсть
Глава 3. УДФ-П-галактозо-4-эпимераза - ключевой фермент га-
лактозного метаболизма растительной клетки
Глава 4. Роль УДФ-Е)-глюкозопирофосфо рилазы в метаболизме
галактозы
Глава 5. Галактаны как продукт галактозного метаболизма
Ш. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 6. Объекты и методы исследований
6.1. Объекты исследований
6.2. Методы исследований
6.2.1. Определение активности галактокиназы
6.2.2. Определение активности УДФ-галактозопирофосфорилазы
6.2.3. Определение активности галактозо-1-Ф-уридилтрансферазы
6.2.4. Определение активности УДФ-0-галактозо-4-эпимеразы
6.2.5. Определение активности УДФ-П-глюкозопирофосфорилазы
6.2.6. Определение активности фосфоглюкомутазы
6.2.7. Определение активности фосфоглюкозоизомеразы
6.2.8. Определение активности фосфоманнозоизомеразы
6.2.9. Определение активности фосфоманномутазы

Определение активности глюкозо-6-Ф-дегидрогеназы
Определение активности малатдегидрогеназы
Определение активности пероксидазы
Определение активности альдолазы
Определение активности каталазы
Выделение, очистка и исследование свойств ферментов
Получение гомогената
Ионообменная хроматография на ОЕАЕ-фрактогслс Адсорбционная хроматография на гидроксилапатите Гидрофобная хроматография Аффинная хроматография Г ель-фильтрация
Жидкостная хроматография низкого давления (ЬРИС) Определение К , V , К К
1 Ш шах
Определение Кеч УДФ-0-галактозо-4-эпимеразы Исследование термостабильности и выяснение оптимальных условий хранения УДФ-0~галактозо-4-эпимеразы Центрифугирование в градиенте плотности сахарозы Электрофорез на пластинках
Жидкостная хроматография высокой разрешающей способности (ИРИС)
Определение концентрации белка
Статистическая обработка экспериментальных данных
Фирменная принадлежность реактивов
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 7. Активность ферментов при выращивании Galdieria sulphur etna на среде с различными углеводами
Глава 8. Очистка и свойства УДФ-И-галактозо-4-эпимеразы из
Galdieria sulphuraria
8.1. Выделение стабильной изоформы
8.2. Активация в ходе очистки нестабильной изоформы
Глава 9. Выделение и характеристика УДФ-О-глнжозопирофосфори-
лазы из Galdieria sulphuraria
Глава 10. Активность ферментов галактозного метаболизма у Pisum
sativum
Глава И. Нестабильность фермента - УДФ-0-галактозо-4-эпимера-
зы из Pisum sativum
11.1. Характеристика первой изоформы
11.2. Свойства второй изоформы
11.3. Субстратное ингибирование УДФ-0-галактозо-4-эпимера-
зы из проростков Pisum sativum
Глава 12. Исследование свойств УДФ-О-глюкозопирофосфорилазы
из проростков Pisum sativum
Глава 13. Изучение транспорта галактозы в клетки корня Pisum sativum
IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
V. ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
usitatissimum (Anderson К. L., Lowe H. I, 1947) и сложных водорастворимых галактанов из Rhodophyceae (Percival Е., 1970). ГДФ-Ь-галактоза была обнаружена у красной водоросли Porphyra perforata (Su J. С. , Hassid W. Z., 1962) и в альбуминовой железе Helix pomatia (Goudsmit E. М., Neufeld E., 1966). Данный нуклеотидный сахар является предшественником в формировании L-галактозы как потенциального компонента L-галактозосодержащих полисахаридов. Растения, которые содержат L-галактозу как составляющий компонент полисахаридов, вероятно, оборудованы дополнительным путём реутилизации L-галактозы, освобождающейся во время метаболических трансформаций, так как обычный путь метаболизирует только D-галактозу (Рис. 3). Однако ни присутствие такого пути, ни предполагаемой L-галактокиназы и ГДФ-L-галактозопирофосфорилазы, которые могли бы быть вовлечены, обнаружено не было. Водорастворимые галактаны из-за своих гелевых свойств находят применение, как в пищевой промышленности в качестве добавок и заменителей, так и в нефтеперерабатывающих сферах, где служат эффективными адсорбентами наиболее трудно регенерируемых нефтяных загрязнителей. Ввиду своей промышленной значимости галактаны являются предметом самого интенсивного исследования (Кочетков Н. К. и др., 1967; Усов А. И., Кочетков Н. К., 1968; Усов А. И. и др., 1969; Усов А. И., Рехтер М. А., 1969; Кочетков Н. К. и др., 1970; Усов А. И. и др., 1971; Кочетков Н. К. и др., 1971; Кочетков Н. К. и др., 1973; Усов А. И., 1974; Усов А. И. и др., 1974; Усов А. И., Козлова Е. Г., 1975; Усов А. И., Яроцкий С. В., 1975; Шашков А. С. и др., 1981; Усов А. И. и др., 1985; Усов А. И. , Добкина И. М., 1988; Усов А. И., Вергунова Г. И., 1989; Усов А. И., Чижов А. О., 1989; Усов А. И. и др