Селективный анализ кортикостероидных гормонов с помощью микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии

• Автор: Черкасова, Ольга Павловна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 146 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Биосинтез стероидных гормонов
1.2. Методы анализа кортикостероидых гормонов
1.2.1. Традиционные методы анализа
1.2.2. Хроматографические методы
1.2.3. Микроколоночная хроматография
1.3. Методы выделения кортикостероидных гормонов из биологических
образцов
1.3.1. Экстракция органическими растворителями
1.3.2. Твердофазная экстракция -
1.3.3. Обработка надпочечников
1.4. Содержание кортикостероидных гормонов в крови и надпочечниках в
интактном состоянии и при различных воздействиях
1.4.1. Содержание кортикостероидных гормонов в отдельных надпочечниках (асимметрия надпочечников по массе и продукции гормонов)
1.4.2. Содержание кортикостероидных гормонов в надпочечниках животных при различных воздействиях
1.5. Постановка задачи исследования
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Схема эксперимента
2.2. Взятие анализируемого материала
2.3. Реактивы
2.4. Условия хроматографирования
2.5. Набивка хроматографических колонок
2.6. Вычисление площадей хроматографических пиков
2.7. Измерение времен удерживания
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Разработка методики селективного определения кортикостероидных гормонов в плазме крови и ткани надпочечника человека и животных
3.1.1. Подбор условий хроматографического разделения
3.1.2. Экстракция кортикостероидных гормонов из сыворотки крови человека

3.1.3. Определение кортикостероидных гормонов в плазме крови крыс
3.1.4. Определение кортикостероидных гормонов в ткани надпочечника
3.1.5. Обсуждение
3.2. Исследование содержания кортикостероидных гормонов в плазме крови и
ткани надпочечника у крыс в интактном состоянии и при хроническом
воздействии
3.2.1. Концентрация кортикостерона и 11 -дегидрокортикостерона в плазме крови крыс первой группы
3.2.2. Содержание кортикостероидных гормонов в надпочечниках животных первой группы
3.2.3. Масса левого и правого надпочечника у крыс первой группы
3.2.4. Обсуждение
3.3. Исследование содержания кортикостероидных гормонов в плазме крови и
ткани надпочечника у крыс, подвергнутых острому воздействию
3.3.1. Концентрация кортикостерона и 11-дегидрокортикостерона в плазме крови животных второй группы
3.3.2. Содержание кортикостероидных гормонов в надпочечниках крыс второй группы, подвергнутых острому оперативному вмешательству
3.3.3. Масса левого и правого надпочечника контрольных и подопытных животных второй группы при оперативном вмешательстве
3.3.4. Обсуждение
3.4. Исследование содержания кортикостероидных гормонов в плазме крови и
надпочечниках крыс через 6 месяцев после отмены хронического воздействия
3.4.1. Содержание кортикостерона и 11-дегидрокортикостерона в плазме крови крыс третьей группы
3.4.2. Содержание кортикостероидных гормонов в надпочечниках животных третьей группы
3.4.3. Масса левого и правого надпочечника контрольных и подопытных животных третьей группы
3.4.4. Обсуждение
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

где Стах - концентрация в максимуме пика, а а - стандартное отклонение распределения концентраций (которое предположительно описывается гауссианой), выраженное в единицах объема раствора. Следовательно, если заменить в уравнении (1) сг на Ур/4, то концентрацию в максимуме пика для пробы с массой т8 можно определить из выражения:
п _ 2л[2 т5 _ 1.6 т8
= (2)
„ _ 2л/2
”" =/я ею 7п(3)
где - отклик детектора, соответствующий данной массе пробы т5 (т,-/кА). Из уравнения (3) следует, что концентрация компонента в максимуме пика Стах пропорциональна корню квадратному из числа теоретических тарелок N и обратно пропорциональна длине колонки Ь и квадрату ее диаметра с1с2 . С уменьшением размеров колонки, особенно ее диаметра, концентрация компонента в максимуме пика на выходе из колонки резко возрастает. Это означает, что при той же массе пробы чувствительность обнаружения может быть повышена. В этом состоит одно из важнейших преимуществ микроколоночной хроматографии [ИсииД, 1991].
Таким образом, микроколоночная хроматография за счет уменьшения объемов вводимой пробы, уменьшения степени размывания хроматографической зоны как внутри колонки, так и вне ее ( у микроколоночного хроматографа “Милихром” объем ячейки детектора для составляет 1.2 мкл против 8 мкл в обычной ВЭЖХ) привела к значительному повышению чувствительности хроматографического анализа, резкому снижению расхода растворителей и сорбентов и позволила расширить диапазон определяемых веществ [Вагат е.а., 1983; Барам Г.И., 1997].